EJERCICIO ILEGAL DE LA PROFESIÓN MÉDICO VETERINARIA Cristian Rojas Alfaro

PRIMERA PARTE. EJERCICIO ILEGAL DE LA PROFESIÓN MÉDICO
VETERINARIA – FIGURA DELICTUAL
 Cristián Rojas Alfaro
Abogado Colegio Médico Veterinario

Para entrar en lo que conocemos como ejercicio ilegal de la profesión, se hace
necesario explicar la noción básica de lo que es un delito.
El art. 1º del Código Penal define delito como "toda acción u omisión
voluntaria penada por la ley". Para que se constituya un delito deben
cumplirse una serie de condiciones básicas y no basta sólo el hecho o acción
típica realizada por la persona. Una persona comete delito cuando se cumplen
todas las siguientes condiciones:
a) Acción Típica: Es la acción, o bien omisión, descrita en el Código Penal y
que tiene una responsabilidad penal. En palabras sencillas es el acto que la
persona realizó, o bien que dejó de realizar en el caso de omisión, que está
penado explícitamente por la ley. La tipicidad dice relación con la descripción
completa de los hechos que constituyen el delito.
b) Antijuridicidad. La acción es antijurídica. Significa que no existe una causal
de justificación, legalmente válida, que explique y por ende exima de
responsabilidad a la persona. Por ejemplo la legítima defensa es una causal de
justificación penal.
c) Culpabilidad: Debe haber intención en la persona para realizar la acción
típica (dolo).
Cumpliéndose estas tres condiciones se instaura un delito. Cuando falta la
culpabilidad, es decir no hay dolo sino culpa, se habla de cuasidelito.
El art. 213 del Código Penal describe la figura de ejercicio ilegal de la
profesión: “El que se fingiere autoridad, funcionario público o titular de
una profesión que, por disposición de la ley, requiera título o el
cumplimiento de determinados requisitos, y ejerciere actos propidichos cargos o profesiones, será penado con presidio menor en sus
grados mínimo a medio y multa de seis a veinte unidades tributarias
mensuales.
El mero fingimiento de esos cargos o profesiones será sancionado como
tentativa de delito que establece el inciso anterior.”
Dos elementos objetivos copulativos deben concurrir:
1.-El fingimiento y
2.-El ejercicio de actos propios de la profesión.
Para que este delito se lleve a efecto no se requiere un resultado determinado
o que las conductas lesionen un bien jurídico, sino basta la mera actividad.
1.-El Fingimiento.
La conducta consiste en fingir ser autoridad, funcionario público o titular de una
profesión, es decir requiere que el autor aparente o imite ser un médico
veterinario. Requiere más de una simple afirmación, de una mentira, porque
fingir involucra una actividad o aprovechamiento de una situación que haga
verosímil o respalde la afirmación mendaz , como por ejemplo mostrar una
credencial falsa, un certificado, que lo presenten terceros como tal, etc.
El fingimiento ha de referirse a ser titular de la profesión de médico veterinario.
La profesión de médico veterinario sólo puede otorgada por aquellas
instituciones universitarias superiores que se encuentren reconocidas por el
Estado. Es importante aquí hacer referencia a que los egresados de la carrera,
en caso alguno se le considera como profesional mientras no se encuentren
investidos del título profesional, por lo que no pueden realizar actos propios del
médico-veterinario.
2.-Ejercicio de actos propios de la profesión.
Aquí es necesario tener en cuenta los siguientes aspectos:
1º Los actos que se realicen deben ser actos propios de la profesión. Al
respecto podemos remitirnos a la segunda parte de este informe que da cuenta de  dichos cargos o profesiones, será penado con presidio menor en sus
grados mínimo a medio y multa de seis a veinte unidades tributarias
mensuales.
El mero fingimiento de esos cargos o profesiones será sancionado como
tentativa de delito que establece el inciso anterior.”
Dos elementos objetivos copulativos deben concurrir:
1.-El fingimiento y
2.-El ejercicio de actos propios de la profesión.
Para que este delito se lleve a efecto no se requiere un resultado determinado
o que las conductas lesionen un bien jurídico, sino basta la mera actividad.
1.-El Fingimiento.
La conducta consiste en fingir ser autoridad, funcionario público o titular de una
profesión, es decir requiere que el autor aparente o imite ser un médico
veterinario. Requiere más de una simple afirmación, de una mentira, porque
fingir involucra una actividad o aprovechamiento de una situación que haga
verosímil o respalde la afirmación mendaz , como por ejemplo mostrar una
credencial falsa, un certificado, que lo presenten terceros como tal, etc.
El fingimiento ha de referirse a ser titular de la profesión de médico veterinario.
La profesión de médico veterinario sólo puede otorgada por aquellas
instituciones universitarias superiores que se encuentren reconocidas por el
Estado. Es importante aquí hacer referencia a que los egresados de la carrera,
en caso alguno se le considera como profesional mientras no se encuentren
investidos del título profesional, por lo que no pueden realizar actos propios del
médico-veterinario.
2.-Ejercicio de actos propios de la profesión.
Aquí es necesario tener en cuenta los siguientes aspectos:
1º Los actos que se realicen deben ser actos propios de la profesión. Al
respecto podemos remitirnos a la segunda parte de este informe que da cuenta de acciones propias del médico veterinario y las normas jurídicas dispersas en
que constan algunas facultades privativas del mismo.
Es del caso también agregar que muchas conductas y acciones no quedan
circunscritas a una norma legal determinada, sino que son obtenidas de la
práctica médico veterinaria, es decir de los procedimientos y acciones que el
médico veterinario va realizando en el progreso sostenido del ámbito
profesional. Así, aparecen cada día nuevos procedimientos y actos médico
veterinarios que van evolucionando y que deben considerarse para ver si se ha
cometido el delito respectivo de ejercicio ilegal de la profesión.
2º Basta un solo acto que caiga en la órbita de la competencia
profesional. La descripción del delito no exige varios actos.
3º No por el hecho de recibir el delincuente dinero por concepto de
honorarios, el delito se transforma en estafa, si no que sigue siendo
ejercicio ilegal de la profesión.

SEGUNDA PARTE. COMPENDIO DE ACTUACIONES PRIVATIVAS DE LA
PROFESIÓN MÉDICO VETERINARIA Y NORMATIVA LEGAL Y
REGLAMENTARIA QUE LOS RIGEN

Son tantos e innumerables las actuaciones profesionales, y tan
dispersa la normativa legal, o a veces inexistente y solo dada por la costumbre,
que se hace necesario definir un marco regulatorio que permita al profesional
médico veterinario conocer cuales son actuaciones privativas de la profesión y
cuáles puede eventualmente delegarlas en técnicos o ayudantes.
A continuación se informa un compendio de actuaciones privativas
de los médicos veterinarios y de la normativa relacionada con la profesión, sin
perjuicio de que la costumbre profesional sea una importante fuente creadora
de normas y que está en constante evolución.  A.- En cuanto a cuáles serían aquellas actuaciones privativas de la
profesión de médico veterinario, generalmente reconocidas como tales,
podemos señalar las siguientes:
Salud Animal
1. Efectuar, prevención, diagnóstico, prescripción terapéutica, y tratamiento
de las enfermedades de los animales y certificar el estado de salud y
enfermedad de los mismos. Esto incluye la facultad de recetar fármacos.
2. Realizar, interpretar y certificar análisis microbiológicos, parasitológicos,
biológicos, químicos y físicos, imagenológicos y técnicas de laboratorio
destinadas al diagnóstico, prevención y tratamiento de las enfermedades de los
animales.
3. Formular y elaborar específicos farmacológicos y preparados biológicos,
sueros, vacunas, opoterápicos y aplicar biotecnologías y reactivos biológicos y
no biológicos, destinados al diagnóstico, prevención y tratamiento de las
enfermedades de los animales y certificar la calidad de los mismos .
4. Controlar y efectuar la distribución y el expendio de zooterápicos y
demás productos de uso en medicina veterinaria.
5. Ejercer la Dirección Técnica de laboratorios destinados a la elaboración
de productos, sustancias medicinales, diagnósticos, sueros, vacunas u otros
productos biológicos, opoterápicos o similares para uso veterinario.
6. Organizar, dirigir y asesorar establecimientos destinados a la
prevención, diagnóstico y tratamiento de enfermedades de los animales,
incluidas las que afectan a la población humana (zoonosis). 7. Planificar, organizar, dirigir, ejecutar, evaluar y certificar acciones
sanitarias destinadas a la prevención, control y erradicación de las
enfermedades de las distintas especies animales.
8. Ejercer la dirección de los Servicios Veterinarios de establecimientos que
realicen competencias deportivas con animales y toda concentración de
animales con diversos fines.
9. Certificar el estado de salud, enfermedad y aptitudes de los animales
sometidos a la experimentación o utilizados en la elaboración de específicos
farmacológicos y preparados biológicos destinados a la medicina animal y
humana.
10. Intervenir en la elaboración de normas relacionadas con la aprobación,
transporte, almacenamiento, manipulación, comercialización y uso de
específicos farmacológicos y preparados biológicos para uso veterinario.
Medicina Preventiva, Salud Pública y Bromatología
11. Investigar y desarrollar reactivos y preparados biológicos de origen
animal aplicables en seres humanos.
12. Planificar, organizar, dirigir y asesorar acerca de la cría y producción de
animales de experimentación.
13. Planificar, organizar, ejecutar, evaluar y certificar acciones destinadas a
la prevención, control y erradicación de plagas, vectores y enfermedades de los
animales que afectan a los animales y a hombre.
14. Planificar, dirigir, ejecutar, evaluar y certificar acciones sanitarias y
estudios epidemiológicos destinadas a la prevención, control y erradicación de
las enfermedades transmisibles por los alimentos (E.T.As).  15. Ejercer la dirección de servicios veterinarios de control y prevención de
las Zoonosis.
16. Asesorar en la elaboración de las normas referidas a las condiciones
higiénico-sanitarias de la producción animal y de las actividades involucradas
en la producción y distribución de productos y alimentos.
17. Diseñar, aplicar, auditar y certificar sistemas de inocuidad y de
aseguramiento de la calidad de los alimentos.
18. Efectuar el control higiene-sanitario de las especies animales, sus
productos, subproductos y derivados para consumo y uso humano e industrial.
19. Efectuar el control higiénico-sanitario, análisis y controles bromatológicos
y de identificación comercial de al elaboración, procesamiento, transformación,
conservación, transporte y expendio de alimentos.
20. Organizar, dirigir y asesorar en el control de residuos y deshechos de
origen biológico con el objeto de evitar la contaminación ambiental, y lograr su
reutilización.
21. Realizar estudios, investigaciones y asesoramiento relativos a la vida
animal, el estado de salud y enfermedad, a la zoonosis y a las enfermedades
compartidas con el hombre, al mejoramiento de la producción animal y al
control de las condiciones higiénico-sanitarias de dicha producción y de los
productos y subproductos de origen animal.
22. Certificar las condiciones higiénico-sanitarias, bromatológicas y de
identificación comercial de los alimentos y de los establecimientos destinados a
la elaboración, procesamiento, transformación, conservación y expendio de
alimentos.  23. Asesorar, realizar y controlar la formulación de productos alimenticios en
lo relativo a la composición, elaboración, conservación, valor nutritivo, calidad y
sanidad de los mismos.
Producción Animal
24. Investigar, desarrollar y aplicar biotecnologías para la reproducción y
conservación de las especies animales.
25. Planificar, organizar, dirigir, asesorar, controlar y certificar la producción
animal en todas sus etapas y las tecnologías aplicadas.
26. Elaborar, aplicar y evaluar normas y criterios para la identificación,
clasificación y tipificación de los animales y sus productos.
27. Planificar, organizar, dirigir, controlar y certificar datos trazables en
explotaciones animales
28. Evaluar la aptitud clínica, sanitaria y zootécnica de animales, para
efectos de determinar la pertenencia de su admisión a concentraciones de
animales realizadas con distintos fines para la importación y exportación.
29. Efectuar estudios e investigaciones para el mejoramiento zootécnico de
las distintos especies animales.
30. Formular, elaborar y evaluar alimentos para consumo animal.
31. Organizar, dirigir y asesorar establecimientos de producción, cría y
explotación de especies de la fauna silvestre.
32. Ejercer la Dirección de Estaciones Zootécnicas, de Inseminación
Artificial y de Genética Animal.
33. Planificar, organizar, ejecutar y evaluar la prevención y control de los
factores bióticos y abióticos que afectan la producción agropecuaria. Asesorar
en el diseño de las instalaciones rurales, máquinas y herramientas destinadas
a la producción pecuaria.
Otras
34. Planificar, organizar y dirigir jardines zoológicos, parques y reservas de
fauna autóctona y exótica.
35. Elaboración de normas relativas a la protección y bienestar animal.
36. Realizar arbitrajes y peritajes en todo lo referido a la profesión veterinaria  37. Integrar los cuadros docentes en todos los niveles de la educación y
realizar investigación básica y aplicada en las diferentes áreas de las ciencias
veterinarias como en otras ciencias relacionados.
38. Realizar estudios orientados a la evaluación de las consecuencias que
puedan provocar fenómenos naturales sobre la producción pecuario.
B.-Disposiciones legales y administrativas que reglamentan el ejercicio de
la profesión de médico veterinario. Las más importantes son:
a) DECRETO 466 MINISTERIO DE SALUD, SUBSECRETARIA DE SALUD,
de 31 de diciembre de 1984, REGLAMENTO DE FARMACIAS,
DROGUERIAS, ALMACENES FARMACEUTICOS, BOTIQUINES Y
DEPOSITOS. Arts 1, 36 y 83, que se refieren a la facultad de recetar del
médico veterinario y a sus funciones como Director Técnico en Depósitos de
Productos Farmacéutico Veterinarios.
b) DECRETO N° 405, MINISTERIO DE SALUD, REGLAMENTO DE
PRODUCTOS SICOTRÓPICOS (Publicado en el Diario Oficial de 20 de
Febrero de 1984). Arts. 22 letra g y 32, en que se refieren fundamentalmente
acerca de facultades de los médicos veterinarios de recetar y almacenar
sicotrópicos.
c) D S Nº 307. AGRICULTURA, de 25 de octubre de 1979 “REGLAMENTO
DE ALIMENTOS PARA ANIMALES”. Art 10 que se refiere a que sólo bajo
prescripción de un Médico Veterinario podrá elaborarse alimentos o
suplementos a pedido, medicado, los que no podrán expenderse al público en
general.
d) RESOLUCIÓN Nº 3114 del SAG ESTABLECE MEDIDA SANITARIA PARA
CONTROL DE BRUCELOSIS BOVINA, de 29 septiembre de 1998, modificada
el 23 de julio de 1999 por RESOLUCIÓN Nº 2200 del mismo organismo  Facultades de toma de muestras y certificaciones de médicos veterinarios en la
prevención de la brucelosis bovina.
e) DECRETO SUPREMO N°94 REGLAMENTO SOBRE ESTRUCTURA Y
FUNCIONAMIENTO DE MATADEROS, ESTABLECIMIENTOS
FRIGORIFICOS, CÁMARAS FRIGORÍFICAS Y PLANTA DE DESPOSTE Y
FIJA EQUIPAMIENTO MINIMO DE TALES ESTABLECIMIENTOS. (
Publicado en el Diario Oficial en noviembre de 2008). Art 21 que se refiere a las
salas de servicio de inspección médico veterinarias.
f) Código Sanitario, art. 126, en cuanto permite a los médicos veterinarios la
dirección técnica de droguerías y laboratorios que elaboren materias primas o
drogas de origen biológico y también de las droguerías y depósitos
farmaceúticos de uso exclusivamente animal.
g) Código Sanitario, Art. 110, que se refiere a que la autoridad sanitaria le
corresponde, directamente o mediante delegación a entidades públicas o
privadas o a profesionales calificados, la inspección médico veterinaria de los
animales que se beneficien en ellos y de las carnes.
h) APRUEBA REGLAMENTO DE PREVENCIÓN DE LA RABIA EN EL
HOMBRE Y EN LOS ANIMALES. DECRETO N° 89 /2002 Ministerio de Salud.
Artículo 24. En cuanto las clínicas veterinarias y, en general, todo médico
veterinario que vacune animales sanos contra la rabia deberán informar
mensualmente el número de vacunas aplicadas y el número y especies de
animales vacunados, de donde se puede colegir la facultad de vacunar y
certificar vacunaciones contra la rabia de los médico-veterinarios.
i) DFL R.R.A. N° 16 de 1963. Ley de Sanidad Animal. ARTICULO 4°: “Los
animales que se internen deberán ser inspeccionados en las Aduanas
respectivas, por los médicos veterinarios del Servicio Agrícola y Ganadero. Y
en caso de que estén atacados de una enfermedad contagiosa o que ofrezcan
sospechas de estarlo, serán sometidos cualesquiera de las siguientes medidas:
desinfección, vacunación, inyecciones, reacciones reveladoras cuarentena,  devolución, secuestro o sacrificio de los animales”. El ARTICULO 4° BIS
señala a su vez que: “Prohíbese la internación de animales y aves con taras
hereditarias anomalías morfológicas que afecten su productividad, a juicio de
los médicos veterinarios a que se refiere el artículo anterior”. Los arts. 6 y 7 de
esta ley además obligan a los médicos veterinarios a declarar enfermedades
contagiosas de animales.
j) LEY 20.380 SOBRE PROTECCIÓN DE ANIMALES : Artículo 7°.- “Los
experimentos en animales vivos sólo podrán practicarse por personal
calificado, que evitará al máximo su padecimiento. Se entenderá por personal
calificado aquel que tenga estudios en las áreas veterinaria, médica o de
ciencias afines, certificados por una institución académica del Estado o
reconocida por éste.
Si los experimentos consistieren en intervenciones quirúrgicas que
necesariamente importen el uso de anestesia para evitar sufrimientos
innecesarios, deberán ser practicados por un médico veterinario u otro
profesional competente.” Y Artículo 15.- “Todas las actividades y prácticas que
se realicen a animales en las clínicas y centros de atención veterinaria deberán
ejecutarse bajo la dirección responsable de un médico veterinario”.
TERCERA PARTE. FORMA DE PROCEDER PARA EJERCER ACCIONES
PENALES EN CONTRA DE FALSOS VETERINARIOS.
El delito de ejercicio ilegal de la profesión es un delito de acción penal pública,
lo que significa que cualquier persona puede ponerlo en conocimiento de la
autoridad.
El Ministerio Público o Fiscalía Pública es el único órgano que tiene por fin
investigar los delitos y puede tomar conocimiento del delito de tres formas:
1.-De oficio, al llegar a su conocimiento directamente la perpetración de un
delito.  2.-Denuncia. Puede hacerse ante el Ministerio Público, o la Policía de
Carabineros o Investigaciones. La denuncia no tiene formalidades y la Policía o
el Ministerio Público están obligados a recibirla. Ante el Ministerio Público se
puede hacer también por escrito, individualizándose el denunciante.
A la denuncia se pueden acompañar los elementos probatorios recopilados,
informar los nombres de testigos o víctimas con sus domicilios a fin de que se
les cite a declarar, acompañar documentos u otros medios de prueba, según se
detalla más adelante.
3.-Por querella. La regla general para querellarse es que lo haga la víctima del
delito o su representante legal. Igualmente, aún cuando la Reforma Procesal
Penal restringió la calidad del querellante, es posible que una persona que no
sea víctima directa, se querelle siempre que se encuentre “domiciliada en la
región, respecto de delitos cometidos en la misma que afectaren intereses
sociales relevantes o de la colectividad en su conjunto” (art. 111 del Código
Procesal Penal). Claramente el delito de ejercicio ilegal de una profesión puede
perfectamente encontrase en esta hipótesis de afectar los intereses sociales o
de la colectividad.
La querella se interpone a través de abogado ante el Juez de Garantía, quien
debe declarar si es admisible, y en caso de que así lo estime remite los
antecedentes al Fiscal respectivo para que inicie investigación.
ASPECTOS PROBATORIOS.
Aún cuando la investigación y la carga de llevar adelante la acción penal
corresponde al Fiscal respectivo una vez que se han puesto en su
conocimiento los es de la máxima importancia colaborar desde un principio en
el aporte de pruebas.
Las pruebas en el ámbito penal no están restringidas por lo que se puede
aportar todo tipo de pruebas.  Importante puede ser la preconstitución de pruebas, es decir tener pruebas
antes de denunciar, que permitan el éxito de la acción.
Por lo anterior respecto a la ayuda a proporcionar al Fiscal y a la
preconstitución de pruebas se recomiendan las siguientes acciones:
1.-Tener o guardar documentos en que el imputado aparezca como médico
veterinario: tarjetas de presentación, recetarios, firmas en recetas de
prescripción de medicamentos o diagnóstico veterinario, certificados de
vacunación, protocolos de operación, etc.
2.-Indicar nombres de víctimas o testigos con sus domicilios, los que podrán
ser llamados a declarar aún contra su voluntad.
3.-Enviar alguna persona que verifique el ejercicio ilegal, haciéndose pasar por
cliente con mascota enferma.
4.-Eventualmente grabar en audio o video intervenciones del inculpado, y
entregar el material obtenido a la Policía o el Fiscal directamente. Esta prueba
tiene el riesgo de ser eventualmente considerada como prueba ilícita, pero
sirve para orientar la investigación, lo que unido a otros medios de prueba
puede llevar al éxito de las acciones.
Finalmente, diremos que al igual que en otros delitos, la mejor forma de atacar
el ejercicio ilegal de la profesión es actuando preventivamente, informando a la
población sobre la forma de detectar a estos delincuentes y sobre su forma de
operar, teniendo principal responsabilidad en esta difusión los propios médicoveterinarios
agrupados en sus respectivos Colegios Regionales.

CRISTIAN ROJAS ALFARO
ABOGADO COLMEVET

VACUNAS  INFLUENZA  EQUINA: Quid novi

Paillot  R. *,  Hannant D, Kydd  J.H., Daly  J.M. . Vaccine 24 (2006) 4047–4061

Animal  Health  Trust,  Centre  for  Preventive  Medicine,  Lanwades  Park,  Newmarket,  Suffolk CB8 7UU, UK

Corresponding author. Tel.: +44 8700 502460x1247; fax: +44 8700 502461.

E-mail  address:  romain.paillot@aht.org.uk (R. Paillot).

Numerosos métodos de vacunación han sido evaluados y comercializados en el caballo, las más recientes son  las vacunas del virus de la gripe adaptada al frío y en vector poxvirus.

El subtipo H3N8 del virus de la influenza equina (VIE)  no se ha controlado con éxito mediante la vacunación y sigue siendo una grave amenaza para el bienestar del caballo y un problema económico para la industria del caballo

Históricamente, las vacunas contra la influenza equina, se componen principalmente de virus enteros inactivados, que proporcionan protección contra la influenza a través de la inducción de una inmunidad humoral de corta duración; Esto está en contraste con la inmunidad estimulada por la infección natural, que es más robusta y de vida más larga debido a la la estimulación de las respuestas inmunitarias tanto humorales como celulares. El desarrollo de nuevas estrategias de vacunación que imitan más de cerca la estimulación del sistema inmune inducida por la infección VIE, ha sido el foco de desarrollo de la vacuna EIV en las dos últimas décadas. Por lo tanto, las vacunas modernas compuestas de cualquiera de los virus, plásmidos de ADN de influenza vivos atenuados o poxvirus vectores que codifican para proteínas de virus de la gripe se desarrollaron y algunos se han comercializado. Hoy en día, un nuevo enfoque de la vacunación VIE utilizando virus de la influenza viva atenuada diseñado mediante genética inversa, también está en desarrollo.

Los virus de influenza pertenecen a la familia Orthomyxoviridae y se clasifican como A, B y C sobre la base de diferencias antigénicas en la nucleoproteína (NP) y proteína de la matriz (M1). EIV es un virus de influenza tipo similar al tipo A del virus de influenza humana. Tipo de influenza contienen ARN segmentados (alrededor de 13,6 kb) que consisten en ocho fragmentos lineales, de cadena sencilla genómicas de polaridad negativa. Seis segmentos de código para las proteínas individuales de hemaglutinina (HA), neuroaminidasa (NA), nucleoproteína (NP), tres subunidades de la polimerasa viral (PA, PB1 y PB2), una matriz de códigos de segmentos para 1 y 2 (M1 y M2) y un segmento codifica para la proteína no estructural 1 (NS1) y la proteína de exportación nuclear (NEP). En algunas cepas, el marco de lectura 1 PB1 codifica para la proteína PB1-F2.

Debido a la segmentación del genoma, recombinación genética puede ocurrir en las células infectadas simultáneamente con dos subtipos diferentes de virus de la gripe. El reordenamiento de los genes HA o NA es la base para el cambio antigénico, pero esto no se ha observado en caballos.

El subtipo H7N7 fue aislado de caballos en Checoslovaquia en 1956 (cepa prototipo: A/eq/Prague/1/56). El último brote confirmado se produjo en 1979 en Italia, aunque este subtipo se aisló en la India en 1987 y Egipto en 1989. Sin embargo, se informó de las pruebas serológicas de la continua circulación de este subtipo de virus en Europa Central y Asia en fecha tan tardía como 1991. El virus de la influenza equina H7N7 todavía puede circular en una forma subclínica y persistir en un nivel muy bajo en algunas partes del mundo.

La gravedad de los signos clínicos de la enfermedad inducidos por la infección EIV ha sido correlacionada con la síntesis local de la interleucina-6 (IL-6) y el interferón (IFN). La gripe equina induce una alta morbilidad y mortalidad en los potros, caballos en mal estado de salud y los burros. En los adultos, la mortalidad se asocia generalmente con las infecciones bacterianas secundarias que conducen a la pleuritis, neumonía o púrpura hemorrágica.

Transmisión interespecies

En 1989, se informó de una epidemia de gripe equina en el noreste de China y resultó en una mortalidad de hasta 20% en algunos rebaños. El virus causante de este brote (A/eq/Jilin/89) ha demostrado ser más estrechamente relacionados con virus de la gripe aviar H3N8 que a virus de la gripe equina en el caso. A pesar de una transmisión entre especies con éxito, esta cepa no se extendió más allá o persisten en China. Sin embargo, este brote ilustra el papel de las aves, como reservorio natural de los virus de influenza A, en la posible aparición de nuevas cepas de virus de la gripe capaz de infectar a los mamíferos.  Transmisión mamíferos a mamífero de la influenza A virus también se produce (por ejemplo, los cerdos a humanos). En los últimos años, los virus de influenza aislados de perros (por ejemplo, galgos) que sufren enfermedad respiratoria grave con un alto porcentaje de mortalidad, fueron identificados como estrechamente relacionado con el virus de la influenza equina (H3N8) y podrían indicar un nuevo caso de la transmisión entre especies.

Selección de cepas para vacunación

Las diferencias antigénicas entre H3N8 linajes   “europeos y americanos “' son suficientes para poner en peligro la protección cruzada  y, en consecuencia, las directrices actuales recomiendan que las vacunas contra la gripe equina contienen un representante de cada uno ( H3N8 ) linaje . La recomendación actual del Panel de Expertos en Vigilancia de la gripe equina es que las vacunas contengan un A / eq / South Africa/4/2003 (H3N8) como virus ( linaje americano ) y un A/eq/Newmarket/2/93 ( H3N8 ) - como virus ( linaje europeo ) . La presencia de las cepas H7N7 del virus de la gripe equina (es decir A/eq/Prague/56 o A/eq/Newmarket/77 ) no se recomienda más  en las vacunas.

Los brotes de gripe equina se han seguido produciendo en Europa, América y otras partes del mundo desde 1989 (por ejemplo, Hong Kong en 1992, Dubai en 1995 y Filipinas en 1997) . En las zonas previamente libres de la enfermedad, la aparición o introducción de EIV indujeron brotes devastadores (por ejemplo, África del Sur desde 1986 hasta 1987, India 1987). Hoy en día, sólo Australia, Nueva Zelanda e Islandia son conocidas por permanecer libres de gripe equina.

 Respuestas inmunes protectiva

La infección de células epiteliales con EIV es probable que  estimule una respuesta inmune innata en los caballos, como se describe en los seres humanos después de la infección por virus de la influenza . Sin embargo, esta respuesta no se ha estudiado extensamente en el caballo. Infección EIV se ha asociado con la síntesis local de IL-6 e IFN , que es probable que sea IFN tipo I ( es decir, IFN / ). Tanto la IL - 6 e IFN /. son las citoquinas pro -inflamatorias. IL - 6 es una citoquina que muestra una amplia gama de actividades en las células B y T y está implicado en el desarrollo de respuestas de IgA mucosa . IFN / presenta una variedad de actividades inmunomoduladoras que afectan tanto innata (por ejemplo, mejora de asesina natural ( NK) ) y la inmunidad adaptativa ( por ejemplo, la promoción de la respuesta Th1 ) . La activación de las células NK , otro componente de la respuesta innata al virus de la gripe , está probablemente involucrado desde la derivación in vitro de las células que ejercen una actividad citotóxica genéticamente no restringida a las células diana infectadas  por EIV, ha sido informado .

La infección natural con EIV confiere una inmunidad a largo plazo a la re-infección. Experimentalmente, ponis estimulados para EIV por una infección anterior están protegidos contra los signos clínicos y mediante genética inversa.

Tanto las respuestas inmunes humoral y celular se han demostrado para proteger contra la infección por EIV.  Estas respuestas son susceptibles de ser iniciado en los tejidos linfoides asociados nasales (NALT) de las vías respiratorias superiores, que poseen un epitelio especializado conocido como epitelio del folículo asociada (FAE). FAE se caracteriza por las células membranosas microvillus (M) que entregan antígenos del virus a las células B  y T del tejido linfoide subyacente.

La respuesta inmune humoral

HA y NA moléculas son los principales objetivos de la respuesta inmune humoral contra el virus de la influenza equina. En ponis nativos, la infección experimental con EIV induce altos niveles de IgM en suero (que por lo general declinan dentro de 50 días después de la infección )  , y el anticuerpo IgA específica para el virus , IgGa y IgGb en suero y secreciones nasales.

En los mamíferos, IgA nasal puede ser muy importante para la neutralización de virus de la gripe intracelular , para la prevención de la diseminación del virus después de la infección , y para la protección cruzada contra  virus de la influenza antigénicamente diferentes  . Por lo tanto, una respuesta inmune de la mucosa es importante para proteger a los caballos contra el EIV . En los potros , IgA puede ser inducida localmente en la mucosa o transportado desde el suero a las secreciones nasales en el caso de anticuerpos IgA dimérica . Después de la infección experimental de ponis , suero y mucosa ( es decir, nasofaringe y tráquea) IgA aumentó durante la segunda semana después de la infección con EIV y declinó rápidamente ( sólo el 20 % de IgA en suero restante 2 meses después de la infección ) . La IgA como respuesta  anamnéstica es más rápida y persistente que  la respuesta primaria.

Niveles de anticuerpos fijadores del complemento  medidos por hemólisis radial simple (SRH) también aumentó significativamente en el suero de 7 días después de una infección primaria de ponis. Sin embargo, la respuesta de anticuerpos SRH  tiende  a disminuir rápidamente (sólo 25% del valor de pico 3 meses después de la infección), y la mayoría de los caballos fueron negativos para anticuerpos de SRH 62 semanas después de la exposición a EIV. IgGa y IgGb isotipos son eficaces tanto en la fijación del complemento y ensayos de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos in vitro, pero su función efectora in vivo no ha sido determinada. IgGa / b anticuerpo específico del virus en suero también se incrementó en 7 días después de la infección con EIV, pero  declinó a niveles pre-desafío en un período de 15 meses.

Pequeños cambios antigénicos en HA y NA epítopos (deriva antigénica) permiten que el virus pueda evadir el sistema inmune humoral protectora del hospedero. No existe protección cruzada entre los anticuerpos contra los subtipos H7N7 y H3N8 de la gripe equina.

Respuesta inmune celular

Infección  por VIE induce una inmunidad de largo plazo independiente de anticuerpos circulantes. Ponies con títulos bajos o indetectables de anticuerpos específicos de HA fueron clínicamente y virológicamente protegidos de la infección por  desafío más de 1 año después de la infección con EIV. En la ausencia de una respuesta de anticuerpos detectable, es probable que una inmunidad mediada por células (CMI) era responsable de esta protección . Sin embargo  sólo hay unos pocos informes sobre CMI después de la infección de la gripe equina.

Un complejo mayor de histocompatibilidad ( MHC ) restringido de linfocitos T citotóxicos ( CTL ) la actividad específica de la gripe equina se demostró 14 días después de la infección experimental  y una respuesta significativa CTL específicas de virus era aún detectable 6 meses después de la infección . Esta actividad se incrementa en una segunda infección de la gripe. Por tanto, parece que  en ausencia de cualquier anticuerpo detectable, una respuesta de CTL es coincidente con la protección contra la infección , aunque esta hipótesis no ha sido probado en caballos . Recientemente, una regulación de ARNm que codifica el IFN , IL - 4 e IL - 2 se muestra en células mononucleares de sangre periférica (PBMC ) y los ganglios linfáticos 14 días después de la infección experimental , pero el significado de ésta en relación con la protección se desconoce. Un  ensayo  de medición específica de virus IFN - .  síntesis se ha publicado recientemente  y puede ser adaptable a EIV en el futuro próximo , por lo que la medición de la inmunidad celular contra este virus será  más fácil .

Las vacunas contra el virus de la gripe equina

El objetivo principal de la vacunación antigripal es la reducción de los signos clínicos de la enfermedad, con la consiguiente mejora del bienestar animal que resulta en un periodo de convalecencia más corta y reducir las infecciones secundarias. La eliminación  reducida de virus tiene importantes implicaciones para la propagación de la infección y es sin duda el otro gran objetivo que debe lograrse mediante la vacunación. La vacunación también debe proporcionar inmunidad a largo plazo, una respuesta eficiente de la memoria y de la protección cruzada contra el virus de la influenza de diferentes cepas. Se ha estimado que el 70 % de una población dada de caballos debe estar plenamente vacunados para prevenir las epidemias de gripe.

En la evaluación de eficacia de la vacuna en los caballos, la protección clínica contra la influenza equina se define por la ausencia de fiebre y otros signos clínicos inducidos por la infección , tales como secreción nasal y tos . Protección virológica se define por la ausencia de virus en las secreciones de la mucosa tal como se detecta por titulación de virus en extractos de hisopo nasal.  ' La seroconversión ' se define como un aumento significativo de anticuerpo .

Calendarios de vacunación pueden diferir de acuerdo a las regulaciones de cada país, el tipo de vacuna y las recomendaciones del fabricante de la vacuna. Sin embargo, un programa estándar para la vacunación de la gripe equina requiere que los caballos vacunados principalmente tienen que recibir una segunda vacunación dentro de los 3 meses. En general , las vacunas de refuerzo deben ser administrados dentro de los 6 meses de la segunda vacunación y al menos anualmente a partir de entonces , pero en algunos casos , los refuerzos se aplican  con más frecuencia .

Estrategias de vacunación actuales se pueden dividir en la administración de las vacunas "vivas" o bien "muertas" . Vacunas "muertas" son con virus completo , proteínas de las subunidades y las vacunas de ADN. Vacunas "en vivo" incluyen el virus atenuados o vacunas de vectores vivos basados ​​en vectores de  virus.

Vacunas "muertas" o inactivadas

Desde la introducción de las vacunas de EIV en la década de 1960, la mayoría de las vacunas contra la gripe equina disponibles comercialmente contenía virus completo inactivado o subunidades. Las principales ventajas de estas vacunas son la ausencia de patogenicidad, la replicación del virus y posterior difusión entre los hospederos. Para la preparación de estas vacunas, el  VIE  ha sido tradicionalmente cultivadas en huevos de gallina embrionados. Para reducir la posterior reactogenicidad que puede ocurrir a la inmunización repetida con la proteína del huevo, se han desarrollado métodos de cultivo de tejidos.

Vacunas de virus de influenza inactivado

Protección contra la enfermedad de la influenza conferida por las vacunas inactivadas convencionales está fuertemente asociado con los niveles de anticuerpos circulantes contra la HA, a condición de que la cepa de la vacuna y la cepa infección de prueba sean genética y antigénicamente similares. Por ejemplo, en un estudio inicial, ponis con una hemólisis radial simple (SRH ) el nivel de anticuerpos > 154 mm2 fueron resistentes a la infección con EIV , y resistente a los signos clínicos de la enfermedad con los niveles de anticuerpos SRH > 85 mm2. En un segundo estudio, ponis fueron protegidos de la infección con un nivel de anticuerpos SRH > 120 mm2, y de signos clínicos de la enfermedad con anticuerpos SRH > 90 mm2 . Cabe señalar que la gravedad de la enfermedad puede variar dependiendo del método de infección (por ejemplo, la instilación por vía intranasal frente a nebulizado por aerosol  y el título del virus utilizado para la infección de prueba , y estos factores podría influir en el nivel de anticuerpo SRH requerido para la protección . Sin embargo  está claro que los altos niveles de anticuerpo SRH inmediatamente antes de la exposición al virus de la gripe juegan un papel importante en la protección.

El isotipo de anticuerpos inducida por una vacuna contra el virus de la gripe inactivada convencional ( A/eq/Kentucky/1/81 )  fue analizado y muestra estar compuesto solamente por IgG(T) anticuerpos de vida corta post vacunación  (menos de 100 días)(. IgG (t) anticuerpos son conocidos por su eficacia en la neutralización de toxinas bacterianas y están involucrados en la respuesta inmune a los parásitos intestinales. Los anticuerpos de IgG (T) de isotipo no son capaces de fijar el complemento , pueden inhibir la fijación del complemento por otros anticuerpos de isotipo IgG  y por lo tanto son poco importantes en la  protección contra el VIE . Vacunas sistémicas con todo el  VIE  inactivado requieren  generalmente adyuvantes para mejorar el nivel y la durabilidad de la respuesta. Las vacunas de virus completo inactivado con adyuvante con fosfato de aluminio o hidróxido de aluminio no inducen actividad CTL específica del virus de la gripe .

Gel de hidroxifosfato de aluminio amorfo (alhidrogel o Adjus - phos ) son adyuvantes comunes, que , en ratones , estimulan la síntesis de IL - 4 y activan las células Th2 , con una mayor IgG1 y la producción de IgE . Otros adyuvantes incluyen polímeros de ácido acrílico reticulado con polialilsacarosa , o una lipídica  , no de aluminio , adyuvante de doble fase ( MetaStimTM ) . Carbomer , un agente emulsionante que es un ácido poliacrílico con un peso molecular extremadamente alto , también se utiliza como un adyuvante. La inoculación intranasal de la vacuna de la gripe inactivada con la toxina B del cólera (CTB) como adyuvante se ha demostrado que induce una respuesta inmune local, compuesto  e IgA  y anticuerpos neutralizantes específicos del virus , que protege los potros de la infección con EIV . Vacunas inactivadas convencionales administradas por vía intramuscular puede causar reacciones adversas muy ocasionales (por ejemplo, dolor local y la hinchazón, pirexia ) .

Las vacunas de subunidades

Vacunas de subunidades actual contiene proteínas HA y NA purificados. Estas proteínas de membrana (antígenos) son generalmente adyuvada con saponina de quillay (Quil A) o integrados en complejos inmunoestimulantes ( ISCOMTM1) para mejorar su antigenicidad . ISCOMsTM se forman a partir de una matriz (es decir, una combinación de Quil A, fosfolípidos y colesterol), que incorpora proteínas de membrana para dar, partículas auto adyuvantes estables , unidas por interacciones hidrofóbicas . En otras especies, las vacunas ISCOMTM han demostrado una protección exitosa contra numerosos agentes patógenos. A finales de 1980, una vacuna que contiene el antígeno HA ISCOM de A/eq/Solvalla/79 (H3N8) ha demostrado inducir anticuerpos IgGab dura alrededor de 25 semanas en tráquea y nasofaringe de los caballos.

A mediados de 1990 , una vacuna ISCOMTM ( EquipTM ; Pitman -Moore ) que contiene la proteína HA de ambos, A / eq / Newmarket/77 ( H7N7 ) y A/eq/Brentwood/79 ( H3N8 ) se evaluó en ponis antes de una infección de prueba con A/eq/Sussex/89 ( H3N8 ), 15 meses después de tres inmunizaciones ( vacunaciones intramusculares dos 6 semanas de diferencia , y una vacuna de refuerzo 5 meses después ) . Ponis vacunados mostraron una respuesta de anticuerpos HRS contra ambos subtipos de virus después de la vacunación. Sólo 3/7 vacunados desarrollaron una fiebre leve y transitoria, pero los  ponis vacunados fueron casi completamente protegidos de la eliminación del virus después de la exposición

infección ( seis de siete ponis ) en comparación con el grupo control (cero de cada cinco ponis). Dos animales vacunados ni siquiera demuestran un aumento significativo de anticuerpo después de la infección

Con una cantidad equivalente de antígeno HA , una vacuna contra el ISCOM indujo anticuerpos de SSR más eficientemente que una vacuna de virus entero inactivado . Más recientemente ,una vacuna basada en ISCOM que contienen HA de antígeno de Newmarket/77 ( H7N7 ) , Borl ¨ ange/91 ( H3N8 ) y Kentucky/98 ( H3N8 ) ( EQUIP F , Schering- Plough Animal Health ), siempre indujo una fuerte inmunidad protectora contra el desafío con VIE.

Potros recibieron dos vacunas intramusculares, con  6 semanas de diferencia, y  fueron desafiados infectado con el virus de la influenza Newmarket/1/93 4 semanas después de la segunda vacunación .  Anticuerpos SSR  séricos aumentaron después de la primera inmunización y se reforzaron después de la segunda vacunación. Anticuerpos específicos del virus fueron predominantemente de los isotipos IgGa e IgGb ( los mejores mediadores de fijación de complemento ( CF ) de anticuerpo y dependiente de anticuerpos citotoxicidad de las células ) .  IgGc e IgG (T ) virus específicas  se incrementaron después de la segunda inmunización . En  secreciones nasales, se detectaron anticuerpos IgG específicas para el  virus. Ponis vacunados estaban completamente protegidos contra signos clínicos de la enfermedad, pero el 43% mostraron  eliminación del virus después de la  infección de desafío. En otro estudio, la administración vía mucosa de esta vacuna basada en ISCOM - ponis sistémicamente cebados aumentó el nivel de IgA nasal después de la infección desafío, indujo una protección completa contra los signos clínicos de la enfermedad y  reducción de la duración de la excreción del virus en comparación con los controles no vacunados. Sin embargo, la inmunidad inducida por vacunas de subunidades es limitada y depende de la función de los antígenos particulares en la protección. Potros vacunados con una vacuna de subunidad que contiene Quil A como adyuvante no inducen una actividad de CTL específica para el VIE.

En los seres humanos, una vacuna experimental  basada en ISCOM, para la influenza que contiene moléculas de HA se ha demostrado que aumenta la respuesta inmune humoral y podría tener algunos efectos sobre CMI después de la vacunación en comparación con una vacuna inactivada convencional.

En resumen, la eficacia de las vacunas de virus enteros inactivados o de subunidades se basa en su capacidad para estimular altos niveles de anticuerpo de SSR que se requieren para la protección. Sin embargo, esta respuesta de anticuerpos es de corta duración, podría ser muy específico, y la protección posterior podría ser sensible a la variación antigénica de los virus de la influenza. En los caballos, la estimulación de una  CMI específica para el virus de la gripe por estas vacunas no se ha demostrado. La comparación de las diferencias entre las respuestas inmunes inducidas por la inmunización con virus muertos o vacunas de subunidades y la infección viral sugieren que el diseño de vacunas se puede mejorar.

Vacunas de ADN

La administración de plásmidos de ADN ofrece una forma diferente de la vacunación y la protección eficaz contra la infección de la gripe se ha demostrado en varias especies (por ejemplo, ratones, hurones, pollo. La vacunación de ADN resulta  en la expresión in vivo de las proteínas antigénicas, que conducen a la estimulación de respuestas inmunes tanto humoral como celular. Este enfoque es, por lo tanto ventajosa en comparación con el virus completo inactivado o vacunas de subunidades. Técnicamente, el plásmido de ADN es barato de producir, tiene una buena estabilidad y se puede liofilizar para su almacenamiento a largo plazo.

En ratones, Olsen et al.  demostraron que la administración con una pistola de genes de plásmido de ADN que codifica la proteína A/eq/Kentucky/1/81 (H3N8) HA proporciona una protección completa contra la infección de prueba, con la inducción de anticuerpos neutralizantes, los anticuerpos IgG virus específicos en el  suero y  IgA sérica . Por tanto, el impacto de la piel y la inmunización de la mucosa con una vacuna de ADN plásmido de codificación para la proteína HA del virus de la influenza A/eq/Kentucky/1/81 se estudió en el caballo.

Ponies fueron inmunizados por inyección pistola de genes en los sitios de la piel y mucosas (60 sitios de la inyección por la inmunización, 3 vacunas en total, alrededor de 60 días entre cada uno). Caballos vacunados fueron parcialmente a completamente protegidos frente a los signos clínicos de la enfermedad y la eliminación del virus inducida por la infección desafío con una cepa homóloga del virus de la gripe, 30 días después de la última vacunación. Vacunación de ADN indujo IgGa y IgGb respuestas de anticuerpos en suero (es decir, una respuesta de isotipo similar a la infección EIV), pero no se detectaron respuestas de IgA de la mucosa. Respuestas linfoproliferativas específicas del virus y sobre regulación de IFN-. ARNm  se observó después de tres inmunizaciones con la vacuna de ADN, pero difería marcadamente de las respuestas inducidas por la infección vrius la gripe equina en términos de distribución regional (es decir, sangre periférica, el drenaje o los ganglios linfáticos hiliares).

Protección resultante de la vacunación con ADN se asoció con la presencia de ambos o de la inyección intramuscular de vacunas basadas en vectores vivos induce la expresión de antígenos de EIV y estimula tanto las respuestas inmunes humorales y celulares. Los anticuerpos séricos neutralizarán infecciosa EIV y EIV-CTL específicos se lisar las células epiteliales infectadas por anticuerpos de suero IgGa / IgGb y la IgG de la mucosa, que apoyan la idea de que la IgA  en mucosa no es esencial para la protección. Ausencia de eliminación del virus se correlacionó con la presencia de  IgGb en mucosa en el momento de la infección de desafío.

Sin embargo, como la IgA se ha demostrado ser una parte importante de la respuesta inmune inducida por infección natural, las vacunas de ADN se modificaron en un intento de lograr una respuesta tal. La administración conjunta de ADN que codifica para la IL-6 no logró mejorar ya sea la síntesis de IgA o protección contra la infección, pero puede haber causado un cambio a una Th-2 como respuesta de anticuerpos . Otro estudio reciente demostró la síntesis de IgA nasal después de dos vacunas intranasales ADN-HA (33 días de diferencia, derivadas de la cepa A/eq/Kentucky/1/81) seguido de dos vacunas de la piel / mucosa (36 días de diferencia). La co-administración de la toxina del cólera (CT) y de CTB, que estimulan respuestas inmunes tanto humorales como celulares, como adyuvante aumentó título de IgA nasal después de la vacunación en comparación con la vacunación con ADN-HA sola.

Respuestas de anticuerpos IgA y  IgGb también se incrementaron en CT + ADN-HA ponis vacunados después de la infección reto con EIV (81 días después de la última inmunización, la cepa A/eq/Kentucky/1/81) en comparación con ponis vacunados. Sin embargo, los ponis vacunados fueron sólo parcialmente protegidos contra los signos clínicos de la enfermedad y la eliminación del virus. Curiosamente, algunos caballos estaban protegidos clínicamente, a pesar de niveles muy bajos de anticuerpos en el suero en el momento de la infección de desafío.

En resumen, la vacunación de ADN se utilizó para montar una respuesta inmune protectora a la influenza específica en caballos con buena longevidad en comparación con vacunas de virus inactivadas convencionales. Sin embargo, los estudios han demostrado cierta variabilidad en el nivel de protección de los signos clínicos de la enfermedad y la prevención de la diseminación del virus lograda. El método de administración de las vacunas de ADN (múltiples sitios de inoculación y múltiples inyecciones para cada inmunización) es obviamente poco práctico para la práctica veterinaria. Una vacuna de ADN contra el virus del Nilo Occidental se ha licenciado recientemente en América del Norte y permitirá la evaluación de la viabilidad de la vacunación de ADN en el campo.

Vacunas de virus vivo / vector

Hannant et al.  demostraron que la respuesta inmune inducida por la infección experimental con el virus de la influenza equina protege caballos contra la reinfección hasta por 1 año. Estos resultados sugieren que una vacuna contra el virus de la gripe equina imitando la infección natural debe ser más eficiente en ofrecer una protección que las vacunas inactivadas convencionales.

El uso de un virus modificado / virus vivos atenuados de la gripe o un virus-vector de codificación en directo para las proteínas VIE son los principales enfoques investigados en los últimos 20 años para producir una vacuna  con VIE vivo  contra la influenza.

Vacuna viva atenuada del virus de la influenza

La inmunización con un virus de la influenza vivo atenuado imita la infección natural. Los antígenos se presentan al sistema inmune a través de ambas vías exógenas y endógenas, y por lo tanto se espera que las vacunas estimulen  una respuesta inmune similar a aquellos inducidos por la infección.

Virus de la gripe de genoma recombinado

El genoma del virus de la gripe consta de ocho segmentos de ARN de cadena sencilla. Reordenamiento genético puede ocurrir cuando una célula se infecta simultáneamente con dos subtipos diferentes de influenza A virus. Un virus de la gripe con un crecimiento limitado en mamíferos (por ejemplo, virus de la gripe aviar) puede ser reordenadas con un virus de la gripe de mamíferos para obtener un virus vivo atenuado capaz de inducir una respuesta inmune protectora. Un recombinante que expresa proteínas internas del virus de la gripe aviar A / Duck / Nueva York/6750/78 ( H2N2 ) y las glicoproteínas de superficie del virus de influenza equina A/eq/Georgia/1/81 ( H3N8 ), fue  evaluado en su la eficacia y seguridad en hámsters y ponis. La exposición de los ponis a este recombinante  indujo signos clínicos leves en comparación con el virus de la influenza equina  parenteral. El recombinante indujo una respuesta de anticuerpos y se derramó después de la infección. Cinco, y medio mes después de la exposición al recombinante, ponis fueron parcialmente protegidos de una infección de desafío con el virus de la influenza equina parenteral, la duración de la diseminación del virus también se redujo ligeramente. La protección limitada observada en este estudio puede tener su origen en la respuesta inmune generado contra glicoproteínas de la superficie de la gripe equina producidas por el recombinante. La respuesta generado contra proteínas internas aviar probablemente jugó en el mejor caso  un papel limitado en la protección contra el virus de la gripe equina. Las vacunas basadas en recombinantes aviar / equinos sin duda sería demasiado arriesgado utilizar. Recombinantes  podían estar seguros en los caballos, pero inducir enfermedad en las aves. Por otra parte, el virus de la gripe aviar puede transmitir directamente a los caballos, y ha causado un brote severo en el pasado (es decir, la gripe equina en China durante 1989 por una causa de la gripe aviar (H3N8). Teniendo también en cuenta las recientes infecciones de humanos con el virus de la gripe aviar en Asia, el uso de tales recombinantes para la vacunación de caballos causaría  muchas preocupaciones de seguridad.

Virus de la gripe adaptada al frío o sensible a temperatura (Ts)

Un virus de la gripe  sensible a la temperatura se espera (Ts)  muestra una disminución significativa (hasta 100 veces) en el título a una temperatura restrictiva (por ejemplo, 39º C) en comparación con el título obtenido a una temperatura permisiva (por ejemplo, 34.ºC) . In vivo, el virus de la gripe Ts  se multiplica de manera eficiente en el ambiente más fresco del tracto respiratorio superior en los que inducen respuestas inmunitarias locales y sistémicas. Sin embargo, la replicación es ineficiente en el ambiente más cálido del tracto respiratorio inferior en los caballos (38-39º C), donde la replicación del virus de tipo salvaje puede inducir la bronquitis, bronquiolitis, neumonía intersticial, congestión y edema

También se  ha especulado que la temperatura corporal elevada de caballos podría reprimir la reversión del virus. A finales de 1980, el clon Ts 8B1 (teniendo una lesión Ts en el gen PA) se deriva de la reordenado  de influenza humana A Ts virus donante (teniendo lesiones Ts en la polimerasa y los genes NP) con un tipo salvaje A/eq/Cornell/16/74 (H7N7) virus de influenza equina. En el caballo, la instilación intranasal de clon 8B1 no causó signos clínicos detectables o respuestas febriles. Virus de la vacuna que fue  diseminada retuvo el fenotipo Ts. Después de desafío  infectado (28 días después de la última exposición a la vacuna) con el virus de la influenza H7N7 equina parental, ponis fueron parcialmente protegido y por completo de los signos clínicos de la enfermedad y la eliminación del virus (21 de 40 ponis vacunados no eliminan el virus después de la infección por inoculación)

A mediados de la década de 1990, clon 8B1 virus fue utilizado como el virus de donantes con el tipo salvaje A/eq/Kentucky/1/81 (H3N8) virus de la gripe para producir un virus  recombinante H3N8 Ts (clon 255). Potros vacunados por una suspensión nebulizada que contiene el virus recombinante  no mostraron signos clínicos después de la inmunización con Clone 255 pero  hizo seroconversión para la inhibición de la hemaglutinación (HI) de anticuerpos después de la exposición al genoma recombinante, lo que indica antigenicidad del genoma recombinante. Cuando fueron desafiados infectado con el virus de la gripe de los padres A/eq/Kentucky/1/81 1 o 2 meses después de la inmunización, ponis vacunados fueron completamente protegidos contra los signos clínicos de la enfermedad, pero la eliminación del virus se observó en 20 a 33% de los ponis vacunados. Ponies se  mantuvieron protegida contra los signos clínicos de la enfermedad cuando fueron desafiados 7 y 10 meses después de la inmunización, pero el porcentaje de ponis con  eliminación del virus aumentó a 55%.

Virus vivo adaptado al frío (Ts)  de influenza equina también fueron producidos por pases seriados en huevos embrionados de gallina a temperaturas reducidas gradualmente a 26º C. Más recientemente, una adaptada al frío, Ts, la vacuna contra el virus de la influenza equina viva modificada (Flu Avert ® 2 en la vacuna; Intervet) derivado de la A/eq/Kentucky/1/91 virus de la influenza (H3N8) de tipo silvestre, se ha evaluado y es comercialmente disponible en América del Norte. Con una inmunización de la mucosa nasal, ponis vacunados fueron completamente protegidos de los signos clínicos de la enfermedad cuando se desafiaron  5 semanas más tarde con el virus de la influenza A/eq/Kentucky/1/91 padres. Los vacunados mostraron una  protección clínica significativa cuando se re-desafió 6 meses después de la vacunación y las temperaturas rectales más bajas cuando los enfrentaron 12 meses después de la vacunación. La propagación del virus también se redujo fuertemente después de la vacunación.

Sólo el 20% de los vacunados eliminó  virus cuando  se desafío  5 semanas después de la vacunación. Seis y 12 meses después de la vacunación, la duración de la diseminación del virus ha disminuido significativamente en comparación con ponis de control no vacunados. Aunque no se observó correlación entre la respuesta de anticuerpos HRS y protección, ponis vacunados desarrollaron una respuesta SSR anamnesis después de la exposición. Esta vacuna también se ha demostrado que protege contra la infección de  potros con un virus de la gripe heterólogo. La vacunación  estas con vacunas vivas atenuadas  producen inmunidad a largo plazo que limita claramente la duración y la gravedad de los signos clínicos y la eliminación del virus después de la infección por inoculación con virus de influenza equina. Sin embargo, estas vacunas no proporcionan una inmunidad estéril.

El uso de vacunas de virus de influenza modificados / atenuados vivos siempre ha causado  preocupación por la alta tasa de mutación y recombinación potencial del virus de la influenza. La naturaleza segmentada del genoma del virus de la gripe podría permitir la recombinación con un virus de tipo salvaje que cocircule  y la subsiguiente pérdida de atenuación o / y la aparición de un nuevo virus de la gripe altamente patógena. En los seres humanos, sin embargo, una vacuna contra el virus de la influenza viva atenuada (mezcla de dos virus de tipo A ( H1N1 y H3N2 ) y un virus de tipo B ) ha sido aprobado y se encuentra actualmente en uso ( FluMist ® 3 ) . Por otra parte, Rusia y los países de Europa del Este han estado usando vacunas de la gripe humana en vivo durante décadas en los programas de vacunación, sin la aparición de nuevos reagrupamientos de virus de la gripe. En los caballos, los estudios han puesto de manifiesto la estabilidad fenotípica de los virus de influenza  adaptados  al frío (Ts) equina en directo utilizado como vacuna , su baja transmisión espontánea de ponis vacunados , y la ausencia de signos clínicos de enfermedad inducidos por la vacunación en los potros con la inmunosupresión inducida por el ejercicio.

Vacunas de vectores basados ​​en virus

Vacunas de vectores vivos recombinantes se construyen insertando genes seleccionados entre el patógeno de interés en virus vivos, infecciosos , pero  que no causan la enfermedad. Con vacunas de vectores basadas en virus , los antígenos virales se expresan y sintetizan de novo dentro de la célula infectada . Por lo tanto , debido a que se presentan a través de MHC de clase I ( endógeno ) y de clase II ( exógenos) rutas de procesamiento de antígenos , los antígenos virales seleccionados pueden estimular tanto las respuestas inmunes humorales y celulares (Fig. 3A ) . Esta estrategia de vacunación ha sido el foco de intensa investigación científica en muchas especies, incluyendo el caballo.  Poxvirus recombinantes han sido ampliamente utilizados para la vacunación. Los poxvirus son genéticamente estables y permiten la inserción de un gran segmento de ADN que codifica para los antígenos extraños seleccionados . Poxvirus recombinante derivado de vaccinia o viruela aviar (es decir, virus de la viruela del canario) están en el mercado (3 FluMist es una marca registrada de MedImmuneVaccines Inc.) Las vacunas basadas en canaripox recombinantes  están disponibles y varios se han desarrollado para el caballo.

A finales de 1980, la inmunización de caballos con virus vaccinia recombinantes que expresan las proteínas HA y NA de virus de la gripe equina responden  con anticuerpos inducidos  éxitosamente (VN , HI y SSR ). Más recientemente, Breathnach et al . investigaron la eficacia de una inmunización inicial con un ADN que codifica la vacuna para las proteínas HA y NP ( Kentucky/1/81 ) y vacunaciones de refuerzo , 6 y 10 semanas más tarde con un virus de vaccinia modificado Ankara ( MVA )que codifica  la mismas proteínas . Virus MVA es una cepa muy atenuada del virus vaccinia que muestra un defecto en la replicación , que se utiliza con frecuencia en protocolos de vacunación de sensibilización-refuerzo . Tras un extenso pasaje in vitro, el virus de vaccinia parental mejoró su  replicación deficiente en prácticamente todas las células de mamífero. La vacunación con ADN primaria no indujo virus detectable respuestas inmunes humorales o celulares específicas , pero la administración de refuerzo de MVA recombinante indujo en suero  altos títulos de anticuerpos específicos  IgGa y IgGb así como una respuesta linfoproliferativa específica del virus y sobre regulación de IFN - . ARNm .

Curiosamente, tanto los antígenos HA y NP estimularon las respuestas inmunes humorales y celulares. La administración de una segunda vacunación de refuerzo tuvo poco efecto en los anticuerpos específicos de virus o de respuestas linfoproliferativas pero regulando  de IFN - . ARNm . La eficiencia de tales vacunas contra la infección EIV se investigó en un estudio reciente. Potros fueron vacunados con MVA solo -HA (tres inmunizaciones) o como parte de un calendario  que incluye un cebado de ADN y dos refuerzos posteriores con MVA - HA o MVA - NP (por ejemplo, ADN - NP más MVA - NP). Potros vacunados con una vacuna  o asociado con un primer ADN MVA -HA fueron protegidos de manera significativa contra los signos clínicos de la enfermedad y  la eliminación del virus después de la infección con VIE en comparación con ponis vacunados. La vacunación estimula tanto las respuestas inmunes humorales y celulares, incluyendo una respuesta de anticuerpos de IgA en la secreción nasal. Protección inducida por la vacunación con MVA - NP fue menor, pero podría ser explicado por la ausencia de una respuesta de anticuerpos VN, como NP es una proteína interna de EIV . Estos estudios proporcionaron pruebas de que los vectores MVA recombinantes que codifican para proteínas de EIV estimulan de manera eficiente el sistema inmunológico y ofrecen un buen nivel de protección.

En 2003, una vacuna modificada  en pox del canario con vector de virus de la influenza (ProteqFlu ® 4; Merial Ltd., Reino Unido) fue autorizada en la Unión Europea para su uso en caballos. Esta vacuna vectorizada en directo es segura, debido a que el virus de la viruela del canario sufre una infección abortiva en células de mamífero. Esta vacuna contiene dos virus recombinantes del canario que codifican para las proteínas HA a partir de cepas Newmarket/2/93 y Kentucky/94 EIV (cepas representativas de Europa y América, respectivamente) adyuvada con Carbormer 974P. La eficacia de esta nueva vacuna comercializada ha sido estudiada recientemente.

Native ponis recibieron una o dos vacunas intramusculares con ProteqFlu ® y se expusieron 14 días después (4 ProteqFlu es una marca registrada de Merial Ltd.) de la última inmunización con una cepa virulenta de EIV (Newmarket/5/03; aislado recientemente en el Reino Unido, que indujeron a la enfermedad grave después de la infección de campo). Después de la primera inmunización, todos los potros vacunados desarrollaron niveles detectables de anticuerpos de SSR y unos ponis montron una respuesta anamnésica después de la segunda inmunización. Individualmente ponis vacunados no eliminan el virus y fueron protegidos o desarrollaron sólo signos leves de la enfermedad después de la infección de prueba con EIV y resultados similares se obtuvieron con ponis vacunados dos veces. La excreción del virus fue casi completamente suprimido en los vacunados

Un aumento de IFN - . y  la síntesis de proteínas se midió también en ponis vacunados después de la infección con el desafío con VIE. Por lo tanto, ProteqFlu ® tiene éxito en la prevención de la infección con cepas relacionadas deVIE . La inmunidad inducida por esta vacuna está dirigida contra las proteínas HA que están sujetos a la deriva antigénica. Por lo tanto se requiere una actualización periódica de la vacuna para asegurar la eficacia continuada. Sin embargo, si hay una discrepancia significativa entre HA vacuna y el virus circulante, la primera línea de defensa (es decir, anticuerpos) puede fallar y una respuesta de células T específica para el virus podría llegar a ser importante en la promoción de la recuperación y eliminación de virus. Es necesario seguir trabajando para evaluar el beneficio de la inclusión de vectores vivos recombinantes adicionales que codifican para las proteínas más conservadas NP o M , que se postulan para contener epítopos CTL inmunodominantes (y demostrado que induce un buen nivel de protección en el caso de NP , para reforzar la respuesta de los linfocitos T específicos del virus proporcionada por las vacunas como ProteqFlu ®.

La inoculación sistémica es la ruta más frecuente de la vacunación a base de virus de la viruela . Pocos estudios han evaluado la eficacia de los poxvirus recombinantes entregados por vía mucosas.  En ratones, la inmunización oral con una vacuna contra la influenza a base de MVA proporcionó una protección completa contra un desafío de la gripe letal. En los seres humanos ,  virus de la viruela del canario no se considera como un fuerte inmunógeno de la mucosa. Sin embargo , la inmunización intranasal con  voctores de la viruela del canario basado  que codifican el virus del moquillo canino genes ( CDV ) hemaglutinina y fusión, fueron  protegidos hurones menores de edad contra un desafío intranasal con virulenta CDV [ 76 ] . En los caballos, vacunación contra la influenza de la mucosa con vectores basados ​​en virus de la viruela aún debe ser evaluada. Una preocupación con las vacunas basadas en virus de la viruela es la presencia de inmunidad pre-existente específica para virus de la viruela y su impacto en la posterior de la vacunación con la misma recombinante. Supresión de la respuesta de anticuerpos a antígeno recombinante codificada por un vector basado en vaccinia ha sido comunicada. Sin embargo, al menos en los caballos, la vacunación con vacunas a base de viruela del canario no tuvo ningún efecto discernible sobre la eficiencia de la inmunización posterior utilizando el mismo vector que codifica para los antígenos homólogos o heterólogos ( Dr. JH Minke , comunicación personal).

Virus de la influenza viva atenuada diseñado por genética inversa

La genética inversa permite la generación de virus de la gripe recombinantes enteramente artificiales de plásmidos de ADN clonados [79]. A mediados de la década de 1990, la aplicación del método de genética inversa para virus de la gripe equina se estudió después de la generación de un virus de la gripe atenuado por la inserción de una mutación en la cola citoplásmica de la proteína NA [80]. Diez años antes de que la generación mediante genética inversa de virus de influenza equina atenuadas que codifican una proteína NS1 truncada carboxi-terminal [81]. Brevemente, un virus recombinante infeccioso se recuperó después de la transfección de una línea celular de riñón de perro (MDCK) con plásmidos que codifican para cada uno de los ocho ARN de la gripe (PB1, PB2, PA, HA, NP, NA, M y NS) de forma simultánea con la proteína plásmidos de expresión (PB1, PB2, PA, NP y NS1).

Derivado de la A/eq/Kentucky/5/02 ( H3N8 ) virus de la influenza , los 3 virus recombinantes obtenidos mostraron una capacidad de replicación baja tanto in vitro en células MDCK , y también in vivo en huevos de gallina embrionados (9 a 11- dayold ) o en ratones después de una infección intranasal . La capacidad de los virus recombinante para inhibir la producción de IFN / . por las células infectadas ( previamente asociados con la proteína NS1 en el virus de tipo salvaje [ 82 ] ) , también fue disminuido [ 81 ] . Sin embargo , el virus recombinante replicó bien en huevos de 7 días de edad de gallina embrionados , que carecen de un sistema competente de IFN en comparación con los huevos de 9 a 11 días de edad . Un IFN / inalterada . la síntesis inducida por la infección celular con virus recombinantes es interesante porque estas citoquinas poseen una actividad adyuvante potente cuando se administra conjuntamente con una vacuna de la gripe humana , la inducción de una respuesta inmune Th1 y la protección contra el desafío  en ratones [ 83 ] . Un virus de influenza equina con una proteína NS1 alterado podría ser una buena cepa maestra para las vacunas de virus vivos atenuados , la genética  reversa que permiten la inserción de genes HA y NA de cepas del virus de la influenza equina epidémicas  . El mismo enfoque ha sido sugerido en el contexto de la vacunación humana por Schickli et al . [ 79 ]

La genética inversa también permite la generación de vacunas de virus "cóctel" como lo demuestra la reciente vacuna bivalente en directo para el virus de la parainfluenza e influenza. Este recombinante virus de la gripe (A/WSN/33, H1N1) posee las regiones codificantes para el ectodominio de la hemaglutinina / neuraminidasa de un virus parainfluenza de tipo murino 1 (virus Sendai) en lugar de la neuraminidasa del virus de la gripe. Los ratones vacunados estaban protegidos de una infección de desafío letal con ambos virus parental [84]. Sin embargo, dicha combinación requiere atención en la selección de genes. En este caso, la actividad de la sialidasa de la ectodominio hemaglutinina / neuraminidasa del virus de la parainfluenza compensado por la falta de la neuraminidasa del virus de la influenza necesario para el virus bivalente para replicarse.

La genética inversa es un método eficiente para generar virus de la influenza viva atenuada recombinante. Sin embargo, tales recombinantes para el virus de la gripe equina aún no se han probado in vivo en caballos para evaluar su antigenicidad y la eficacia en la protección contra la infección por inoculación.

La genética inversa es un método eficiente para generar virus de la influenza viva atenuada recombinante. Sin embargo, tales recombinantes para el virus de la gripe equina aún no se han probado in vivo en caballos para evaluar su antigenicidad y la eficacia en la protección contra el desafío.

Efecto de los anticuerpos maternos y la edad en la vacunación de la gripe equina

Los potros son muy sensibles a la enfermedad . Su única defensa contra los patógenos son los anticuerpos maternos adquiridos a través de la ingestión de calostro durante las primeras horas de vida. Esta inmunidad pasiva puede proteger potros contra la influenza. Sin embargo , la duración de los anticuerpos maternos en los potros es controvertido [ 85-87 ] , pero los anticuerpos específicos de la gripe equina generalmente disminuir a un nivel bajo pero detectable por 6 meses [ 88,89 ] . Protección de los potros se puede mejorar mediante el aumento del título de anticuerpos protectores en el calostro , principalmente por la vacunación de la gripe de la yegua unas pocas semanas antes de parir . Potros de pura sangre son generalmente vacunados temprano para evitar cualquier ventana de susceptibilidad ( cuando la protección contra gripe no supone más por los anticuerpos maternos y aún no la vacunación ) . Sin embargo , los anticuerpos derivados de la madre residuales pueden reducir la eficacia de la vacuna , al menos en el caso de , subunidad inactivados o vacunas de virus atenuados [ 87,89-91 ] . El desarrollo de la tolerancia a los 3 meses de edad potros a la vacunación de la gripe subunidad  se ha informado [ 88 ]pero sigue siendo controvertida [ 89 ] . Por lo tanto, la vacunación primaria debe ser posterior a la completa desaparición de los anticuerpos maternos (es decir, después de 6 meses de edad). El uso de virus basada -vectores de la gripe equina en potros podrían eludir el efecto neutralizante de los anticuerpos maternos en la eficacia de la vacuna . Un segundo factor que influye en la eficacia de la vacuna es débil respuesta inmune del potro a la vacunación , lo que resulta en una pobre protección , y se han asociado con una actividad inmaduro de las células presentadoras de antígeno en comparación con los caballos adultos [ 92 ] . Por lo tanto , el uso de vacunas diseñadas específicamente para inducir una CMI fuerte podría ser menos eficaz de lo esperado . Mecanismos de accionamiento de la maduración de inmunológico del recién nacido sistema aún no se entiende completamente, y como resultado , los esquemas de vacunación eficaces en potros todavía necesita investigación.

Otro factor que influye en la eficacia de la vacunación es la vejez. La senescencia inmune observada en las poblaciones humanas y equinas presenta algunas similitudes [93]. Actividad de las células B y T se altera [94,95] y los títulos de anticuerpos EIV-específica son más bajos en los animales de edad en comparación con los animales más jóvenes [94,96]. El uso de virus de la influenza viva modificada / atenuada equina que la vacuna podría ser un problema en este contexto de la inmunosupresión. Por lo tanto, la vacunación anual con vacunas inactivadas o de subunidades convencionales es probable que sea más seguro en esta población en particular. Serán necesarios más estudios para evaluar el efecto de la edad sobre otros enfoques de la vacunación (por ejemplo, ADN, vectores basados ​​en virus de la viruela).

Conclusión

Hoy en día, los principales tipos de vacunas contra la gripe equina en uso con virus completo inactivado o subunidades. La protección otorgada por esta primera generación de vacunas se basa en los altos niveles de anticuerpos protectores . Las vacunas de segunda generación ( es decir, las vacunas vivas atenuadas y basada en el virus de la viruela ) ya están disponibles. Estos estimulan tanto humoral y celular la respuesta inmune y así imitan más estrechamente la inmunidad protectora inducida por la infección natural con virus de la gripe . Estas vacunas no son todavía ampliamente utilizados y es necesario tiempo para evaluar su desempeño en el campo. Las rutas de entrega de las vacunas de ADN siguen siendo un problema importante , a pesar de su capacidad para proteger a los caballos contra la influenza. Se prevé que vivas atenuadas virus de la influenza de ingeniería mediante genética inversa es casi seguro que será la próxima generación de vacunas contra la gripe equina . Por tanto, una gran batería de armas está  disponible para el clínico equino . Se utilizan varios modelos de animales de laboratorio ( por ejemplo, roedores , hurones y monos) para evaluar la eficacia de la vacuna contra la infección por influenza. Sin embargo, el modelo de caballo permite estudios de campo de una serie de técnicas de vacunas en la población de acogida natural, y la integración de los factores naturales externos (por ejemplo, la dinámica de poblaciones , diversidad genética ) que pueden influir en el resultado de la vacunación . Por lo tanto , el caballo es un modelo interesante de la vacunación en la batalla en contra de la estrategia evolutiva del virus de la gripe .

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