viernes, 14 de junio de 2013

DIARREA VIRAL BOVINA/ENFERMEDAD DE LAS MUCOSAS ACTUALIZACIÓN 2013. Patricio Berríos Etchegaray



DIARREA VIRAL BOVINA/ENFERMEDAD DE LAS MUCOSAS. ACTUALIZACIÓN 2013
Patricio Berríos Etchegaray
Médico Veterinario Ph. D
pbetch19@gmail.com


Introducción

La diarrea viral bovina fue descrita por primera vez en Nueva York USA, en 1946. Siete años después aparece la enfermedad de las mucosas. En 1957 se identifica al virus causante que se denomina virus de la diarrea viral bovina (VDVB). Posteriormente se comprueba que ambos cuadros son causados por el mismo virus y se denominan como complejo diarrea viral bovina/enfermedad de las mucosas (DVB/EM). Desde un punto de vista económico esta enfermedad ha sido considerada como la más importante infección viral de los bovinos (Moennig, 2013).

El VDVB pertenece al género  Pestivirus de la familia Flaviviridae. Inicialmente se le consideró como patógeno sólo para el bovino, aunque puede infectar a otros rumiantes. El género Pestivirus incluye a los  virus de la peste porcina clásica y de la enfermedad de Border, y a dos especies del VDVB, VDVB-1 (virus tipo NADL) y VDVB-2 (virus tipo 890).  Todos los pestivirus tienen un cierto grado de reacción cruzada lo que no permite diferenciarlos solamente  por serología.  El VDVB es un ribovirus cuyo ARN genómico está envuelto por una membrana bilipídica en que se insertan dos glicoproteínas que contienen los principales determinantes antigénicos del virus los que además participan en la unión y  fusión celular;  una tercera glicoproteína actúa en la inmunosupresión. Las cepas del VDVB presentan una considerable variabilidad genética.  El VDVB infecta a los bovinos como una población de variantes virales, diversidad que se creía era debida a su replicación en animales previamente infectados o vacunados; actualmente se acepta que los cambios genéticos ocurren más rápido en hembras gestantes en una serie de infecciones  y en ausencia de una respuesta inmune. Se acepta que esta diversidad genética se debe a una falta de corrección de lectura en la enzima ARN polimerasa ARN dependiente por lo que se incorporan nucleótidos en forma equivocada introduciendo mutaciones que producen poblaciones de virus diferentes llamados “cuasi especies”  (Neil, 2013).

Existen dos genotipos del virus, VDVB1 y VDVB2. Además de una subclasificación en subgenotipos basada en diferencias antigénicas y genómicas, con 12 VDVB1 (a-1) y dos VDVB2 (a y b). En USA se describen tres subtipos, VDVB-1a, 1b y 2a. Y un reporte de un VDVB-2b.  Otra categorización se basa en la presencia o ausencia de efecto citopático viral en cultivos celulares, biotipos citopáticos (cp) y no citopáticos (ncp). En las infecciones naturales se indica un 90% de cepas ncp y un 10% de cepas cp. En USA las cepas predominantes en los casos naturales son ncp (Neil, 2013).

La DVB/EM es una enfermedad cosmopolita.  El VDVB afecta a los sistemas digestivo, respiratorio, reproductivo e inmunológico. Y a los fetos. Generalmente se presenta como una enfermedad sistémica.  Debido a su efecto inmunodepresor este virus está estrechamente relacionado con el complejo respiratorio del bovino.  El virus también  ha sido detectado en ovinos, caprinos y porcinos, así como en rumiantes silvestres y búfalos africanos.  Muchos años necesitó la medicina veterinaria para conocer en detalle la evolución del VDVB, sus implicancias patogénicas y epidemiológicas, entre ellas la recombinación del ARN viral,  las consecuencias de la infección intrauterina y su efecto sobre el sistema inmunológico (Moennig, 2013).

Esta enfermedad compleja y complicada, se inició con la presentación de cuadros agudos de diarrea los que paulatinamente fueron decreciendo en intensidad. Luego apareció la enfermedad de las mucosas de mayor gravedad, relacionada con el biotipo ncp,  en que animales inmunotolerantes luego de la reinfección con el biotipo cp desarrollan una diarrea aguda con erosiones en todo el tracto digestivo. En 1992 se describió un síndrome hemorrágico que se presenta con alta mortalidad y asociado con el biotipo  ncp.  El virus causante se conoce como VDVB tipo 2. En el complejo DVB/EM se describen animales persistentemente infectados, con viremia, y que eliminan  continuamente el virus. Estos animales son inmunotolerantes contra el biotipo ncp.

En esta actualización que resume más de 60 años de investigación, se entrega información en aspectos prácticos tales como diagnóstico, vacunas e  inmunología contra la infección por el VDVB, así como también sobre la biología  del virus y sus interacciones con el sistema inmunológico del hospedero.

La situación en Chile de la DVB/EM comprende trabajos realizados entre 1985 y 2012. Se consideraron las excelentes revisiones realizadas por Reinhardt en 1992 y Celedón en 1993.


Impacto de la infección por el VDVB en la inmunidad adaptativa

Estudios recientes sobre los efectos de la infección por el VDVB en la respuesta inmune abarcan desde la presentación del antígeno hasta la apoptosis de células B. La infección por el VDVB causa inmunosupresión de la inmunidad adaptativa, efecto que es cepa dependiente.  Se ha enfatizado  el estudio de la respuesta inmune en pulmones y tracto intestinal.  Las cepas ncp  activan la rama humoral del  sistema inmune (SI) adaptativo en forma más rápida que las cepas cp, además trafican más a órganos del SI asociados con la respuesta inmune de las mucosas, y persisten más tiempo en tejidos inmunológicos que la cepas cp. Las infecciones agudas con cepas cp  son más bien raras, mientras que las cepas ncp son las predominantes en el terreno. En infecciones agudas o peragudas  las interacciones  son con el sistema inmune intacto, mientras que  en las infecciones persistentes el sistema inmune presenta inmunotolerancia hacia el VDVB que se ha producido durante el desarrollo fetal. Los animales con infección persistente y que presentan  EM tienen ambas cepas, la cepa ncp persistente y la cepa cp mutante, las que juntas son responsables del desarrollo de la enfermedad (Chase 2013).

Diagnóstico de laboratorio de la DVB/EM

Para el control y eventual erradicación de esta enfermedad es fundamental contar con adecuadas pruebas de diagnóstico, de hecho estas pruebas son esenciales para realizar cualquier programa. La idea que la DVB/EM podría ser erradicada de la población bovina comercial  descansa en los progresos que se han realizado durante los últimos años para detectar con seguridad la infección el VDVB en el ganado.  La biología molecular ha aportado el desarrollo de los anticuerpos monoclonales y la implementación de la prueba de  reacción en cadena de la polimerasa - transcriptasa reversa. Tres acciones  son importantes para intentar el control: identificación y eliminación de animales persistentemente infectados, aumentar la respuesta inmune post vacunación e implementación de medidas de bioseguridad (Dubovi, 2013).

Técnicas de diagnóstico:

Aislamiento viral. Para el VDVB se utiliza una línea celular de riñón fetal bovina (MDBK). Es importante esta tecnología porque además puede detectar otros virus presentes en la muestra, incluso revelar la presencia de virus DVB como contaminante del suero fetal bovino utilizando anticuerpos monoclonales.
Inmunofluorescencia e inmunohistoquímica. La detección directa del VDVB en tejidos de animales sospechosos ha sido de gran ayuda en el diagnóstico, especialmente en la detección y eliminación de animales persistentemente infectados.
ELISA (Captura antígeno). Utiliza antígeno NS3 (P 80) que se encuentra muy conservado en la mayoría de las cepas del VDVB. Esta prueba es útil para detectar el antígeno viral en sueros de animales persistentemente infectados, biopsias de piel y en muestras individuales de leche. Las muestras de elección para estas pruebas son suero (plasma), y tejidos como biopsias de piel (orejas). La utilización de esta técnica ha permitido realizar planes de control económicamente factibles.
Pruebas de detección de ácidos nucleicos.  La  utilidad de la amplificación de ácidos nucleicos ha sido facilitada por el rápido progreso  en la secuenciación de ácidos nucleicos. La comercialización de la reacción en cadena de la polimerasa transcriptasa reversa y su alta sensibilidad permite trabajar con “pooles” de muestras de rebaños para detectar animales infectados en forma aguda, animales persistentemente infectados y animales inmunizados  con vacunas preparadas con virus vivo modificado. Cabe señalar que estas técnicas no están disponibles rutinariamente por su alto costo.
Pruebas serológicas. Las más utilizadas son  seroneutralización viral y ELISA. Estas pruebas son empleadas para determinar si un animal ha estado infectado por el VDVB, si un ternero posee anticuerpos calostrales específicos, si están inmunizados apropiadamente, si están infectados en forma aguda y si un ternero ha sido infectado “in utero” (Dubovi, 2013).

Pruebas diagnósticas de apoyo en programas de control.  Las pruebas diagnósticas antes señaladas son capaces de apoyar los programas d control de la DVB/EM. Aunque a pesar de detectar infecciones por el VDVB, animales persistentemente infectados siguen existiendo mas bien, debido a la carencia de efectivos programas de manejo. Tres métodos de diagnóstico se utilizan actualmente  para detectar animales persistentemente infectados. Son: pruebas de inmunofluorescencia  e  inmunohistoquímicas en trozos de piel de orejas; pruebas de ELISA en sueros, piel y muestras de leche individuales; y prueba PCR-TR en sangre, leche y piel de orejas. Las pruebas serológicas se recomiendan para pesquisar animales persistentemente infectados en rebaños en que no se vacuna contra la DVB/EM (Dubovi, 2013).


Respuesta del hospedero al VDVB e interacción con agentes infecciosos en el “feedlot” y en ganado de reproducción

La infección por el VDVB puede afectar a varios órganos del hospedero y actuar en concomitancia con otros agentes infecciosos. El virus tiene un tropismo por varios órganos. Es muy específico en el caso de los terneros persistentemente infectados que se han contagiado durante la preñez, y en el caso de que estos animales se sobreinfectan con una cepa cp y se produzca le enfermedad de las mucosas. El papel del VDVB en las infecciones mixtas o sinergísticas se debe a su capacidad inmunosupresora. La inmunosupresión a nivel de inmunidad innata (vías respiratorias) y adquirida condiciona la producción de infecciones secundarias o coinfecciones (Fulton, 2013).

La DVB/EM se puede presentar en diferentes formas asociadas a la inmunosupresión viral:
Infecciones inaparentes  Como muchas infecciones postnatales pueden pasar desapercibidas en forma inaparente, aunque afectando al feto y  sin síntomas en la madre. Los jóvenes terneros se infectan con más facilidad debido a la pérdida de la inmunidad materna. La vida media de los anticuerpos maternos es de unos 23 días. El período de incubación en el ternero es entre 5 y 7 días, y la viremia no dura más de 15 días. Se describe la presencia de anticuerpos específicos en animales no vacunados.
Infección respiratoria. Se ha demostrado la enfermedad respiratoria por infección experimental. La infección sinergística, viral – bacteriana, debido al compromiso de sistema inmune por daño en el epitelio nasal  y traqueal  y la  consecuente alteración del aparato mucociliar de limpieza lo que permite la colonización bacteriana. Se suma la alteración de la inmunidad innata, macrófagos, células fagocíticas y neutrófilos, junto a la supresión de  linfocitos B y T. En casos de infecciones respiratorias con neumonías fatales,  se han aislado junto al VDVB otros agentes que incluyen virus herpes bovino, virus parainfluenza tipo 3, coronavirus bovino, y M. haemolytica, P. multocida, Histophilus somni y varios tipos de mycoplasmas. En un brote de neumonías en un “feedlot” en Oklahoma se aislaron el VDVB-1a, VDVB-1b y el VDVB-2a. Incluso en un caso semejante se aisló el virus vacunal VDVB-1a cp NADL.
Infecciones en el tracto digestivo.  Estas infecciones pueden ocurrir en cualquier edad, desde neonatos a adultos. Esta presentación primaria generalmente ocurre entre los seis y 24 meses de edad y se manifiesta con fiebre, anorexia, depresión, y a veces con diarrea, úlceras y erosiones en la mucosa oral y lingual. Debido al efecto inmunosupresor del VDVB en algunos casos se encuentran infecciones concurrentes con E. coli, Salmonella spp, cryptosporidiosis, rotavirus o coronavirus bovino.
Presentación  trombocitopenia hemorrágica. El síndrome hemorrágico se caracteriza por trombocitopenia, diarrea sanguinolenta, hemorragias en las mucosas y muerte. El biotipo viral es la cepa  ncp. La enfermedad es generalmente fatal.
Enfermedad de las mucosas. Es de baja morbilidad y alta mortalidad. La EM resulta de la infección de un ternero persistentemente infectado con una cepa cp la que probablemente ha evolucionado o mutado de la cepa ncp. La enfermedad se caracteriza por una grave patología digestiva con úlceras y erosiones por todo el tracto digestivo, lesiones en la piel y espacios interdigitales. En la EM se pueden aislar ambas cepas cp y ncp.
Infecciones del tracto reproductivo y fetal. Estas infecciones se presentan dependiendo de la edad de la gestación. Si la infección ocurre en los primeros días hay efectos negativos en la concepción e implantación del huevo resultando menores tiempos de la concepción y repetidos ciclos.  Aborto puede ocurrir debido a la infección viral entre el día 45 y 175 con cepas cp y ncp. Las vacunas preparadas con VDB vivo modificado no deben emplearse en vacas gestantes. Defectos congénitos y malformaciones pueden ocurrir como resultado de la infección viral entre los días 10 y 150. Los posibles defectos son: hipoplasia cerebelar, microencefalía, hidrocéfalo, hidroencefalía, poroencafalía, hipomielinización, cataratas, microoftalmia, degeneración retinal, neuritis óptica, hipoplasia tímica, hipotricosis, osteogénesis alterada y retardo en el crecimiento.
Terneros persistentemente infectados. Fetos infectados con cepas ncp entre los días 42 y 125 pueden sobrevivir, portar el virus y diseminarlo de por vida, siendo los principales reservorios del VDVB. Estos animales son inmunotolerantes a la cepa ncp infectante, aunque pueden responder con producción de anticuerpos contra cepas heterólogas o cepas vacunales.  Las infecciones que ocurren en el último trimestre de la gestación dan lugar a terneros con anticuerpos específicos pero sin virus. El término “infectados congénitamente” se refiere a estos animales con anticuerpos al nacer pero sin virus detectable (Fulton, 2013).

Respuesta inmunológica contra las vacunas DVB  

Las vacunas contra la DVB/EM están disponibles desde 1960.  Estas vacunas son preparadas con cepas cp. Vacunas inactivadas o preparadas con virus vivo modificado han demostrado ser eficaces bajo condiciones controladas. Tanto la inmunidad humoral como la celular son protectivas. La respuesta de los linfocitos B está dirigida preferentemente contra las proteínas virales E2 y NS2/3, y en menor grado contra las proteínas Erns y E1. El mayor epitope neutralizante se ubica en la mitad N-terminal de la proteína E2.  Las vacunas son efectivas a nivel de rebaño. La vacunación contra la DVB/EM presenta difíciles desafíos debido a que el VDVB carece de lectura de pruebas lo que es responsable de la gran heterogeneidad entre los genomas de las diferentes generaciones del virus. Por otra parte la presencia de animales persistentemente infectados  por toda la vida del animal afecta el control de la enfermedad. El uso de la vacunación para el control de la DVB/EM se justifica porque limita la diseminación del virus, además de reducir la extensión de la enfermedad en animales infectados.  Con respecto a la RI la vacunación induce una respuesta por LC-B y T contra le VDVB, que reducirá la incidencia de la presentación aguda y la presencia de animales persistentemente infectados en un rebaño, aunque no prevendrá la infección de todos los animales debido a la heterogeneidad de las poblaciones virales. Incluso el uso de vacunas preparadas con VVM puede producir un cierto grado de inmunosupresión. Se acepta que para que la vacunación sea efectiva se deben eliminar previamente todos los animales persistentemente infectados (Ridpath, 2013).


Estudios sobre la diarrea viral bovina/enfermedad de las mucosas realizados en Chile

La investigación sobre la DVB/EM en Chile empieza en 1986, y es una de las más amplias en la infectología nacional junto a leucosis enzoótica bovina.  Los laboratorios de virología de la Universidad de Chile y Universidad Austral han sido los más dedicados respaldados con varios proyectos de investigación. Los trabajos iniciales se refieren a aislamiento del virus DVB y estudios de seroprevalencia. Algunos de ellos han incursionado en nuevas técnicas de diagnóstico. Los últimos trabajos inciden en el estudio genético del virus DVB. La bibliografía revisada consiste en los siguientes trabajos publicados:

El primer trabajo sobre DVB/EM realizado en Chile en 1986,  trató sobre el aislamiento de cepas citopatogénicas y no citopatogénicas del VDVB desde muestras de terneros de un brote de la enfermedad ocurrido en la zona sur del país (Reinhardt et al, 1986), lo que confirmó las primeras sospechas de su existencia en Chile dadas por el hallazgo de lesiones típicas de la forma entérica en exámenes anátomo-patológicos (Fiedler et al, 1986).  Previamente, Fiedler y Reinhardt (1986) describieron el modo de infección y la patogénesis de la DVB/EM.

Se considera que el VDVB estaría ampliamente difundido en el país, cuando Reinhardt et al en 1990, en una prospección serológica realizada en 40 predios de la IX y X Región encontraron un 100% de los predios estudiados con al menos un animal seropositivo, y un 73,8% de positividad en las 948 vacas muestreadas, siendo la seroprevalencia en toros de 81,0%.

Reinhardt en 1992 establece que el VDVB se ha detectado frecuentemente en Chile incluyendo animales persistentemente infectados.

En 1993 se aisló el VDVB desde un novillo que presentaba sintomatología nerviosa y dificultad respiratoria, mediante las pruebas de inmunofluorescencia directa e inmunoperoxidasa indirecta en cultivos celulares de pulmón fetal bovino (Meléndez y Celedón, 1995).

En un estudio de prevalencia serológica, realizada en 432 sueros de predios lecheros de la Región Metropolitana, se encontró una prevalencia de 60% demostrándose que el 96% de los predios estaban infectados (Celedón et al, 1996).

En 12 predios lecheros de la provincia de Valdivia la seroprevalencia  predial  para el VDVB fue de un 100% y la individual de 50,9% (Riedemann et al, 1996).
En ganado de carne de la Región Metropolitana se estudiaron 305 sueros de bovinos en engorda provenientes de siete planteles crianceros, detectándose una prevalencia de 86%, de los cuales 262 sueros fueron positivos. Los siete  predios presentaron animales reaccionantes (Celedón et al, 1997). 

En  33 animales en estudio, en 23 de ellos se detectó la presencia del VDVB en el primer pasaje del inóculo en cultivos celulares de PFB, lo que corresponde a un 69.7%. De éstos, 14 correspondían a fetos abortados; uno a un nonato; uno a un mortinato; tres a vacas: una madre de un mortinato, una con síndrome de aborto y una muerta; dos a novillos muertos; dos a terneros: uno con síntomas neurológicos, sacrificado, y uno muerto con síndrome respiratorio (Celedón et al, 1997).

En una investigación realizada en 213 bovinos se detectó un 40% de positivos en 152 animales sospechosos, y un 60% de positivos en 37 animales sin antecedentes, lo que corresponde a un 46% de bovinos portadores e inmunotolerantes (97/213) (Celedón et al, 1997). 1998

En 238 bovinos de predios lecheros de la Región Metropolitana, se detectaron 42 animales con viremia persistente en ausencia o con bajos títulos de anticuerpos específicos, y una prevalencia de 18% de bovinos portadores e inmunotolerantes, presentándose con mayor frecuencia en los animales sin signos clínicos. En 22 de los 34 predios muestreados se detectó la presencia de animales portadores e inmunotolerantes con una prevalencia predial de 65% (Celedón et al, 1998).

En 202 bovinos negativos a  brucelosis por serología, de los cuales 101 casos correspondían a animales sin antecedentes de aborto y/o síndrome vaca repetidora, se detectó una prevalencia de VDVB de 41,6% (85/202). En este grupo el aislamiento viral alcanzó a un 49% encontrándose una diferencia significativa con el grupo sin antecedentes, situación que se interpretó planteando que el VDVB estaría asociado a la presencia de aborto y/o síndrome vaca repetidora (Celedón et al, 1998).

Al utilizar un kit comercial de ELISA indirecto (ELISA-I) para el diagnóstico de anticuerpos de la diarrea viral bovina en suero y leche, se concluyó que este instrumento de diagnóstico tiene alta repetibilidad pero que no mide en igual forma que la seroneutralización, y que es capaz de diagnosticar anticuerpos contra el VDVB en muestras de suero y leche (Celedón et al, 1998) 

En la evaluación del tiempo y valoración del costo de ejecución del diagnóstico del VDVB, mediante aislamiento viral, inmunofluorescencia directa (IFD), ELISA y reacción en cadena de la polimerasa (PCR), se obtuvo un costo promedio, en dólares, de 32,5 para el aislamiento viral, de 9,9 para IFD, 47,1 para ELISA y 7,5 para PCR. En cuanto a tiempo de ejecución operativos los resultados indican alrededor de 21 horas para ELISA, 5 horas para IFD, y al menos 8 días para el aislamiento viral (Ibarra et al, 1998).

En 1998 se implementó la técnica de RT-PCR (Reacción en cadena de la polimerasa) para el diagnóstico del VDVB en bovinos infectados. La técnica demostró tener una sensibilidad similar al aislamiento viral en cultivos celulares además de una alta reproducibilidad (Pizarro et al, 1998).     

Se caracterizaron a nivel molecular 33 pestivirus aislados en Chile,  clasificándose 16 como VDVB-1 y 17 como VDVB-2. Análisis filogenético indicó la presencia de virus pertenecientes a  los tipos VDVB-1a, VDVB-1b, VDVB-1c y VDVB2. La antigenicidad de algunos de estos genotipos se estudió por seroneutralización cruzada encontrándose grandes diferencias entre ellos. Se concluye que en Chile circulan VDVB antigénica y genéticamente heterogéneos de los genogrupos 1 y 2. (Pizarro et al, 2004).

Se  compararon la  seroneutralización (como prueba de referencia), con un "kit" inmunoenzimático (ELISA) comercial, en cuanto a sensibilidad y especificidad en la detección de anticuerpos anti-DVB. Para ello, se analizaron 500 muestras de sueros bovinos provenientes de 50 planteles lecheros de la X Región de Chile.  Los resultados obtenidos indican que, SN detectó 278 sueros como positivos mientras que ELISA detectó 347, lo que representa para ELISA una sensibilidad y especificidad relativas de 91% y 57%, respectivamente. Se postula que ELISA detecta mayor número de reaccionantes en virtud a su mayor sensibilidad diagnóstica en relación a SN, por ello resulta ser un método apto para el diagnóstico serológico de grandes poblaciones animales y de manera absolutamente objetiva (Reinhardt et al, 2001).

Se utilizó un método inmunoenzimático (ELISA-antígeno) para detectar la presencia de animales persistentemente infectados (PI) en planteles lecheros de la Xª Región de Chile, a partir de muestras de suero sanguíneo. Para ello se examinaron 335 sueros de bovinos provenientes de nueve predios.  Los resultados obtenidos indican que el 33,3% de los planteles analizados presentaron algún animal PI y que a nivel de prevalencia intrapredial, ella varió entre 0,7 y 1,0%.  Se concluyó que el método utilizado permite detectar animales PI en forma rápida y sencilla, pudiendo utilizarse en gran cantidad de muestras (Reinhartd et al, 2003).

En un estudio realizado en la región Metropolitana, VI, VII y VIII regiones se encontró  una
prevalencia de rebaños positivos en el rango de 71, 2 a 83% por región, estos datos se obtuvieron del análisis de  tanques de leche de 501 lecherías, con esto se concluye que la DVB está  ampliamente distribuida en el área central de Chile en 1996 (Meléndez y Donovan, 2003)



Se determinó la prevalencia e incidencia de la diarrea viral bovina en individuos entre 6 y 24 meses de cinco predios lecheros de la provincia de Ñuble, mediante la pesquisa de anticuerpos séricos utilizando la técnica de Elisa. La prevalencia de animales seropositivos para el grupo de hembras bovinas  de 6 a 24 meses de edad fluctuó entre un 42,13 y 54 ,08%. La incidencia acumulada de animales seropositivos para el VDVB en el  grupo de hembras bovinas de 6 a 24 meses de edad encontrada en el período de 6 meses fue de un 20,65%.  La prevalencia de animales seropositivos aumentó en relación a la edad de  los animales examinados (p=0,036) (Peralta, 2009).

Se estudió la prevalencia y distribución espacial de brucelosis, leucosis bovina, diarrea viral bovina y rinotraqueítis infecciosa bovina a partir del análisis ELISA de estanques prediales en lecherías de la IX Región, Chile. Este sistema permitió monitorear el estado  de estas enfermedades en 279 lecherías, cobertura que representó al 43%  de las lecherías registradas en la IX Región, abarcando 19.635 vacas  lecheras (14%). Se estableció  por primera vez en
la región una alta prevalencia en la muestra para leucosis (59%), IBR  (76%) y DVB (96%), mientras que se confirmó que brucelosis se encuentra  restringida a unas pocas lecherías (5%) (Felmer et al, 2009).

En el estudio de la eficiencia replicativa de un aislado nacional (CH511) del virus de la diarrea viral bovina, se pudo establecer que los dos virus analizados del subtipo 1j (CH511 y CH1087) presentaron una mayor eficiencia replicativa que los dos virus analizados del subtipo 1b (CH113 y CH1025), en parámetros como duración del ciclo infectivo, rendimiento viral y pendientes en la curva de multiplicación de un paso. En cambio, los virus del subtipo 1b tuvieron significativamente mayores pendientes que 1j en la curva de múltiples pasos y una infección célula a célula más eficiente. Posteriormente, las regiones 5’NCR, 3’NCR, Erns, E2 y NS3 del genoma de la cepa CH511 se secuenciaron  y las secuencias nucleotídicas y aminoacídicas obtenidas se compararon  con las secuencias equivalentes de la cepa estándar NADL del VDVB y con los virus chilenos pertenecientes a los otros subtipos del VDVB, con el objetivo de identificar zonas genómicas sospechosas de ser las responsables de las características replicativas de la cepa CH511.  En este estudio, si bien se pudo encontrar diferencias nucleotídicas en las zonas 5’  NCR y 3’ NCR, la estructura secundaria de estas regiones, que sería determinante para su función, no se vería mayormente alterada. La región NS3 fue la más conservada y la región E2 fue la región más variable de las zonas analizadas. La región codificante para la glicoproteína E2, que corresponde al receptor viral, es una de las proteínas más importantes del virus y por lo tanto es probable que algunas de las diferencias aminoacídicas encontradas entre virus de distintos subtipos, puedan ser las responsables de las diferencias detectadas  en la eficiencia replicativa  y en la diseminación célula a célula. Por último, esta tesis también pudo establecer que la glicoproteína Erns presentó una mutación aminoacídica en el sitio activo de la actividad RNasa de la proteína (Y349H) en ambos virus pertenecientes al subtipo 1j, lo que prácticamente eliminó su actividad enzimática, lo que podría tener incidencia sobre la evasión de la respuesta inmune que induce esta proteína en el VDVB (Ortega, 2012).                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                       
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                 Bibliografía

Celedón M. O. 1993. Nuevos antecedentes en el comportamiento del virus de la diarrea viral bovina. Situación en Chile. Av. Cs. Vet. 8(1): 11 – 17.

Celedón M. O., C. Vargas, L. Ibarra, A. Casanova, P. Berríos. 1992.  Prevalencias serológicas para el virus de la diarrea viral bovina en ganado lechero de la región Metropolitana, Chile. XIII Congreso Panamericano de Ciencias Veterinarias. Santiago, Chile.

Celedón M. O., P. Meléndez, J. Pizarro, L. Ibarra, M. Santibáñez, P. Berríos. 1995. Virus diarrea viral bovina y pérdidas productivas. IX Congreso Nacional de Medicina Veterinaria. Chillán, Chile.

Celedón M. O., C. Vargas, A. Salinas, A. Casanova, L. Ibarra P. Berríos. 1996. Prevalencias serológicas para el virus de la diarrea viral bovina y de la rinotraqueítis infecciosa bovina en predios lecheros de la Región Metropolitana de Chile. Av. Cs. Vet. 11(2): 75 -80. ok

Celedón M. O., L. Rocco, G. Quinteros, M. Santibáñez, P. Berríos. 1997. Puesta en evidencia del virus diarrea viral bovina en bovinos clínicamente afectados. Arch. Med. Vet. 29(2): 189 – 195. Ok

Celedón M. O., L. Palacios, J. Pizarro, L. Ibarra. 1997. Prevalencia de anticuerpos seroneutralizantes para el virus de la diarrea viral bovina en ganado de carne de la Región Metropolitana de Chile.  Av. Cs. Vet. 12(2): 98 – 100.

Celedón M. O., J. Carbonell, L. Ibarra, J. Pizarro. 1998. Detección de bovinos portadores e inmunotolerantes al virus de la diarrea viral bovina en predio lecheros de la Región Metropolitana. Arch. Med. Vet. 30(1): 125 – 132. ok

Celedón M. O., R. Ortega, M. Scorti, J. Pizarro, L. Ibarra. 1998. Relación del virus diarrea viral bovina con aborto y/o síndrome de vaca repetidora en bovinos serológicamente negativos a brucelosis. Resúmenes X Congreso Nacional de Medicina Veterinaria. Valdivia, Chile. Arch. Med. Vet. Nº Extr. 169  ok

Celedón M., O. Campodónico, L. Ibarra, J. Daffner, P. Meléndez. 1998. Evaluación de un kit comercial de ELISA indirecto para el diagnóstico de anticuerpos de la diarrea viral bovina en 3suero y leche. XVI Congreso Panamericano de Ciencias Veterinarias. Santa Cruz de la Sierra, Bolivia. Nov. (TL.b44). ok

Dubovi E. J. 2013. Laboratory diagnosis of bovine viral diarrhea virus. Biologicals 41: 8 – 13.

Chase C.   2013. The impact of BVDV infection on adaptive immunity. Biologicals 41: 52 – 60.

 Felmer R., J. Zúñiga, A. López, H. Miranda. 2009. Prevalencia y distribución espacial de brucelosis, leucosis bovina, diarrea viral bovina y rinotraqueítis infecciosa bovina a partir del análisis ELISA de estanques prediales en lecherías de la IX Región, Chile. Arch. Med. Vet. 41: 17 – 26.

Fiedler H., G. Reinhardt. 1986. Modo de infección y patogénesis de la enfermedad mucosa/diarrea viral bovina (BVD/MD). Arch. Med. Vet. 18(2):79 - 86.

Fiedler H., V. Cubillos, E. Paredes, G. Reinhardt, S. Riedemann, M. Niedda, M. Aguilar. 1986. Enfermedad  mucosa/diarrea viral bovina. Hallazgos anatomo-patológicos de los primeros casos en Chile. Arch. Med. Vet. 18 : 151 - 155.  

Ibarra L., M. O. Celedón, J. Pizarro, M. Peña. 1998. Evaluación del tiempo t valoración del costo de ejecución del diagnóstico del virus de la diarrea viral bovina, mediante aislamiento viral, inmunofluorescencia directa, ELISA y reacción en cadena de la polimerasa. XVI Congreso Panamericano de Ciencias Veterinarias. Santa Cruz de la Sierra, Bolivia. Nov. (TL.b43).                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                        

Meléndez P., M. O. Celedón. 1995. Pesquisa del virus diarrea viral bovina desde un cuadro respiratorio atípico en novillo. Av. Cs. Vet. 10: 83 - 85. ok

Meléndez, P., A. Donovan. 2003. Herd-level ELISA seroprevalence of bovine viral diarrhea antibodies in bulk-tank milk in chilean dairy  herds. Prev. Vet. Med. 60: 237 - 241.

Moennig V.  2013. Foreword. Biologicals 41: 1.

Neill J. D. 2013. Molecular biology of bovine viral diarrhea virus. Biologicals 41: 2 – 7.

Peralta M. 2009. Determinación de la prevalencia e incidencia de la diarrea viral bovina en individuos entre 6 y 24 meses de cinco predios lecheros de la provincia de Ñuble, mediante la pesquisa de anticuerpos séricos utilizando la técnica de Elisa. Memoria de título Medicina Veterinaria. Universidad de Concepción.

Pizarro J., N. Meline, L. Ibarra, M. O. Celedón. 1998. Detección del virus diarrea viral bovina por RT-PCR en linfocitos obtenidos a partir de sangre periférica de bovinos infectados con el virus. X Congreso Nacional de Medicina Veterinaria. Valdivia, Chile. Arch. Med. Vet. Nº Extr. 171.

Pizarro J., M. O. Celedón, M. Aguilera, A. Calisto. 2004.  Molecular characterization of pestivirus isolated from bovines in Chile. Vet. Micro. 115:208 – 217.
Reinhardt  G., S. Riedemann, H. Fiedler, M. Niedda, M. Aguilar,  V. Cubillos. 1986. Diarrea Viral Bovina/Enfermedad Mucosa.  Primer aislamiento del agente causal en Chile. Arch. Med. Vet. 18: 157 – 161.
Reinhardt G., S. Riedemann, S. Ernst, M. Aguilar, R. Enriquez , J. Gallardo. 1990. Seroprevalence of bovine viral diarrhea/ mucosal disease in southern Chile. Prev. Vet. Med. 10: 73 – 78.
Reinhardt G. 1992.  Diarrea viral bovina/ Enfermedad mucosa. Una enfermedad viral compleja. Monografías Med. Vet. 14(1): 49 – 55.
Reinhardt G., L. Carrasco, N. Tadich, S. Riedemann. 2001. Comparación entre dos técnicas de diagnóstico para diarrea viral bovina (dvb) en 50 predios de la X región, Chile. Seroneutralización y enzimoinmunoensayo indirecto (ELISA-I). Arch. Med. Vet. 33(2): 173 -183.
Reinhardt G., C.A. Ochoa,  N. Tadich, S. Riedemann. 2003. Utilización del método de Elisa en la detección directa de antígeno de virus diarrea viral bovina en muestras de suero sanguíneo de bovinos  Arch. Med. Vet. 35(1): 89 – 93.
Riedemann S., G. Reinhardt, N. Tadich, M. Aguilar, R. Aguilar, M. I. Montecinos, J. C. Miranda. 1996. Seroprevalencia de VDVB, VHB-1, PI-3 y VRSB en 12 predios lecheros de la provincia de Valdivia, Chile. Arch. Med. Vet. 28(1): 121 – 124.
Ridpath J. 2013.  Immunology of BVDV vaccines. Biologicals 41: 14 – 19.
Ortega, R.  2012.  Análisis de las regiones genómicas 5’ NCR, 3’ NCR. Erns, E2 y NS3 y su probable influencia en la eficiencia replicativa de un aislado nacional (CH511) del virus de la diarrea viral bovina.  Tesis para optar al Grado Académico de Doctor en Ciencias Silvoagropecuarias y Veterinarias




No hay comentarios:

Publicar un comentario en la entrada