DISTEMPER CANINO. Patricio Berríos E. y Javier Enciso G. 2013

Distemper canino: revisión

Patricio Berríos Etchegaray¹

Javier Enciso Gutiérrez²

¹  Profesor. Universidad de Chile

²  Laboratorio de Cultivo Celular. Facultad de Medicina. Universidad Científica del Sur. Lima. Perú

Resumen. Se acepta que el distemper canino es una enfermedad viral originada en España en 1760, aun cuando Hensinger plantea que fue llevado de Perú a España en el siglo XVIII, en tanto que Laosson considera que la epizootia que arrasó Bohemia en 1028 fue el distemper canino. La enfermedad fue descrita magistralmente por Edward Jenner en 1809, mientras que Karle (1844) logró la transmisión experimental de la enfermedad demostrando que la causa era un agente infeccioso transmisible, y el agente causal que es un paramixovirus fue  descubierto por Carré  en 1905.  En 1923, Laidlaw y Dunkin utilizan las primeras vacunas tratadas con formalina con dudosos resultados en la protección. Se describen varios biotipos del virus DC (VDC) con diferente histotropismo, aunque existe un solo tipo antigénico. Además de los cánidos otras nueve familias de mamíferos son susceptibles al virus DC: Mustelidae, Procyonidae, Ursidae,Viverridae, Hyaenidae, Phocidae y Felidae. Mediante  estudios de la secuencia de ácidos nucleicos del gen H y debido a su gran heterogenicidad (10%), se han  identificado 12 diferentes grupos de genotipos del VDC: American-1 (que incluye la mayoría de las cepas vacunales), American-2 (Norte América), Arctic (Región Ártica y Europa), Asia-1, Asia-2 y Asia-3, Europa, Silvestres europeos), Sud África, Argentina, Tipo Rockborn y un nuevo genotipo de cepas mexicanas. Los aislados de Serengeti son diferentes a los del resto del mundo. En este artículo, se hace una descripción  general de la biología, patogenia, diagnóstico e inmunización del distemper canino, y luego se revisa  la situación de esta virosis en animales silvestres y  en particular la situación en Chile.

Palabras clave: virus distemper canino; distemper en animales silvestres; distemper en Chile.

Abstract. 

It is accepted that canine distemper is a viral disease that originated in Spain in 1760, argues that even if Hensinger was taken from Peru to Spain in the eighteenth century, while Laosson believes that the epizootic which swept Bohemia in 1028 was the canine distemper. The disease was described brilliantly by Edward Jenner in 1809, while Karle (1844) succeeded in the experimental transmission of the disease by showing that the cause was a transmissible infectious agent and the causative agent is a paramyxovirus was discovered by Carré in 1905. In 1923, Laidlaw and Dunkin use formalin-first shots with dubious results in protection. We describe several virus biotypes DC (VDC) with different histotropism, although there is only one antigenic type. In addition to nine other families Canidae mammals are susceptible to viruses DC: Mustelidae, procyonid, Ursidae, Viverridae, Hyaenidae, Phocidae and Felidae. Studies by the nucleic acid sequence of the H gene and due to its heterogeneity (10%), have identified 12 different genotypes groups VDC: American-1 (which includes most of the vaccine strains), American-2 (North America), Arctic (Arctic Region and Europe), Asia-1, Asia-2-3 Asia, Europe, European Wild), South Africa, Argentina, type a new genotype Rockborn and Mexican strains. Serengeti isolates are different from the rest of the world. In this paper, we make an overview of the biology, pathogenesis, diagnosis and canine distemper immunization, and then check the status of this virus in wild animals and in particular the situation in Chile.

Keywords: canine distemper virus, distemper in wild animals; distemper in Chile.

Introducción

La palabra distemper proviene del prefijo de origen griego "dis" que denota anomalía, dificultad o trastorno, y de la palabra "temper" que en inglés significa genio o humor. En español, temperamento (del latín temperamentum) significa carácter, manera de ser o de reaccionar. Distemper significa entonces alteración del carácter.

El distemper canino (DC) también llamado moquillo canino o “hardpad” (cojinetes plantares duros), se admite que se originó en España en el siglo XVIII. Sin embargo, según Charles FedericHensinger (1853) el distemper canino fue llevado desde Perú a España durante el siglo XVIII. La enfermedad había sido descrita en 1764 por Ulloa en su trabajo “Relación histórica del viaje a América meridional”. En 1760 la enfermedad fue reportada en España, luego en Inglaterra e Italia (1764) y Rusia (1770). En 1763, novecientos perros murieron en un solo día en Madrid.  Según Laosson la epizootia que arrasó Bohemia en 1028  habría sido el distemper canino (Encinas, 1945).Los últimos brotes de distemper en perros no vacunados han sido descritos en Finlandia (1977), Suiza (1985), Polonia (2002) y USA (2004).

En 1844, Karle tuvo éxito en la primera transmisión experimental de la enfermedad mediante el raspado de los labios de cachorros con la descarga de perros enfermos. El agente causal sólo fue descubierto en 1905 fecha en que el virus fue descrito como un virus filtrable por Henri Carré, de allí el nombre de enfermedad de Carré del DC. Anteriormente el DC había sido descrito magistralmente por Edward Jenner en 1809.

Carrè comprobó la existencia de un virus filtrable en las decargas serosas; serosidades con un gran poder patógeno logrando transmitir la enfermedadinoculando perros jóvenes con exudados provenientes de de la cavidad nasal, bronquial, pleural, pericárdica y peritoneal luego de haberlas pasado por filtros Chamberlain (Carrè, 1905).

Las primeras vacunas que se utilizaron en 1923, contra el distemper fueron preparadas con material de cerebro de perros muertos y tratadas con formalina (Laidlaw y Dunkin); estas vacunas no protegían contra la infección y tenían dudosos resultados de protección contra la enfermedad. En 1984 se empleó la vacuna contra el sarampión que no impedía la infección con el virus DC pero sí impedía la presentación de la enfermedad. Las vacunas inactivadas no lograron controlar la enfermedad. La primera vacuna preparada, en 1945, con virus vivo modificado en hurones producía la enfermedad y alta mortalidad. Posteriormente, en 1950, se preparó una vacuna en huevos embrionados y en cultivos celulares de embrión de pollo, utilizando las cepas Lederle y Onderstepoort. La cepa Rockborn replicada en cultivos de embrión de pollo producía una buena inmunidad, pero en algunos casos era responsable de encefalitis post vacunal. Las vacunas (Duramune y Vanguard) que utilizaban la cepa Rockborn inducían una mejor respuesta inmune, pero eran responsables de un alto riesgo de enfermedad postvacunal. La vacuna Galaxy que utilizaba la cepa Onderstepoort inducía una menor respuesta inmune pero una menor posibilidad de riesgo de enfermedad postvacunal (Green, 2000). El uso de las vacunas preparadas con virus vivo modificado en la década de los 60 disminuyó la presencia del DC que, sin embargo, posteriormente reapareció. La última serie de vacunas preparadas en 1997 utilizando un vector recombinante (Recombitek) induce una buena respuesta inmunológica y no presenta riesgo de enfermedad postvacunal.

Agente etiológico. El DC es causado por un morbillivirus perteneciente a la familia Paramyxoviridae, orden Mononegavirales. Se describen varios biotipos del virus DC (VDC) con diferente histotropismo, aunque existe un solo tipo antigénico. Ciertos aislados virales, como las cepas Snyder Hill, A75/17 y R52, son altamente virulentos y neurotrópicos. Las cepas Rockborn y Snyder Hill causan polioencefalomielitis, las otras producen desmielinización. Este virus presenta un estrecho parentesco antigénico con los virus del sarampión o rubeola y la peste bovina o rinderpest.

La aparición de un nuevo grupo de VDC  además de la identificación de una mutación  en un aminoácido específico incrementa la capacidad del virus  para replicar en un amplio rango de huésped (Monne y col, 2011) lo que hace altamente posible su diseminación  en especies silvestres (Nouvellet y col, 2013).

Este morbillivirus posee envoltura y un tamaño entre 150 a 300 nm de diámetro, su genoma está constituido por ácido ribonucleico (ARN) no segmentado, de hebra simple y sentido de codificación negativo, formado por aproximadamente 15,7 kb que incluyen 6 genes organizados en unidades transcripcionales separadas y no traslapadas. En dirección 5' - 3' codifica 7 proteínas: la proteína de la nucleocápside (gen N; de 1,5 kb), la fosfoproteína (gen P; que con un largo total de 1,5 kb codifica en las primeras 500 a 1.000 bases de su extremo 5' el gen C y gen V, de las proteínas C y V, respectivamente), la proteína de la matriz (gen M; de 1 kb), la proteína de fusión (gen F; de 1,9 kb), la hemaglutinina (gen H; de 1,8 kb) y la polimerasa grande (gen L; de 6,5 kb) (Sidhu y col 1993). Las proteínas estructurales corresponden a la proteína de matriz, de la nucleocápside, la polimerasa, la fosfoproteína y las glicoproteínas de envoltura, hemoaglutinina y de fusión. Estas últimas son responsables del reconocimiento e ingreso del virus a la célula blanco, siendo el principal objetivo de los anticuerpos neutralizantes.

Genotipos del VDC. Se han clasificado mediante  estudios de la secuencia de ácidos nucleicos del gen H debido a su gran heterogenicidad (10%), identificándose  12 diferentes grupos de genotipos del VDC: American-1 (que incluye la mayoría de las cepas vacunales), American-2 (Norte América), Arctic (Región Ártica y Europa), Asia-1, Asia-2 y Asia-3, Europa, Silvestres europeos), Sud África, Argentina, Tipo Rockborn y un nuevo genotipo de cepas mexicanas. Los aislados de Serengeti son diferentes a los del resto del mundo. La variación de la secuencia de amino ácidos entre los genotipos es mayor a 4%, y las cepas dentro de cada genotipo tienen menos de un 2% de amino ácido variación (Kapil y col, 2011).

El VDC es muy susceptible al calor y se inactiva por el tratamiento a temperaturas entre 50 y 60º C durante 30 minutos. Es también susceptible a la luz ultravioleta. En tejidos extraídos de perros con DC el virus sobrevive por lo menos una hora a 37º C y tres horas a 20º C o 24º C (temperatura ambiente). En climas tropicales el virus no se mantiene viable en las perreras luego de ser eliminado desde los perros infectados. La sobrevivencia del virus es mucho mayor a temperaturas frías, sobreviviendo en el ambiente durante semanas a temperaturas de 0º C a 4º C. En el laboratorio en congeladores con temperaturas de -70º C, o -192º C (Nitrógeno líquido) se mantiene infectivo durante años. La liofilización, obtenida a bajas temperaturas y en alto grado de vacío, es un medio excelente para preservar la estabilidad y por lo tanto la antigenicidad del virus. En cuanto al pH el virus es estable en un pH entre 4,5 y 9,0. El VDC es un virus envuelto y por lo tanto es susceptible al éter y cloroformo, soluciones de formalina diluida (0,5%), fenol (0,75%) y desinfectantes de amonio cuaternario (0,3%).

La inactivación del VDC ocurre 10 minutos después  de la aplicación con cloruro de benzalkonium (0,05%) o un compuesto de amonio cuaternario a temperatura ambiente; el etanol al 10% también es efectivo (Kapil y col, 2011).

Pese a ser un virus envuelto muy sensible al medio ambiente, su constante eliminación a través de todo tipo de secreciones, exudados y fluidos corporales a partir del séptimo día postinfección, y su alta infectividad, permiten que se disemine rápidamente en el ecosistema gracias a la existencia de animales infectados que eliminan el virus antes de manifestar signos asociados a la virosis.

Especies susceptibles. El VDC cuenta con una amplia gama de huéspedes y la evidencia de la infección ha sido confirmada en especies de mamíferos pertenecientes a tres órdenes diferentes, carnívoro, artiodactyla y primates (van Moll y col, 1995; Martella  y col, 2008). In vitro se ha demostrado que una cepa del VDC  con la proteína C intacta tiene el potencial de replicarse en células epiteliales humanas  usando  el receptor nectina-4 como receptor (Otsuki  y col., 2013), así mismo, que el virus adaptado es capaz de usar receptores de células epiteliales  e inmunes humanas, así como de monos y algunos caninos, sugiriendo que potencialmente puede infectar humanos (Sakai y col., 2013).

 Además de los cánidos otras nueve familias de mamíferos son susceptibles al virus DC: Mustelidae, Procyonidae, Ursidae, Viverridae, Hyaenidae,  Phocidae y Felidae. En animales acuáticos,  se describe, el morbillivirus del delfín que afectó a delfines rayados del Mediterráneo, además el morbillivirus de la marsopa fue detectado en marsopa de bahía del noroeste de Europa; el  virus del moquillo focino en focas grises y de bahía del noroeste de Europa, y virus del distemper canino en focas Baikal de Siberia.

El VDC afecta principalmente a carnívoros terrestres de las familias Canidae: perros, zorros, lobos, coyotes, chacales; Mustelidae: nutrias, hurones, martas; Procyonidae: coatí y mapache; Hyaenidae: hiena; Felidae: félidos salvajes como leones, tigres, leopardos en cautividad. También afecta a carnívoros marinos como las focas y cetáceos como el delfín. Se han identificado diversos morbillivirus: virus moquillo canino, virus moquillo focino, virus moquillo del delfín, virus moquillo de la marsopa. En el caso específico del virus del moquillo canino éste afectó a focas Baikal en 1980.

Transmisión. Pese a ser un virus envuelto muy sensible al medio ambiente, su constante eliminación a través de todo tipo de secreciones, exudados y fluidos corporales a partir del séptimo día pos infección, y su alta infectividad, permiten que se disemine rápidamente en el ecosistema gracias a la existencia de animales infectados que eliminan el virus antes de manifestar signos asociados a la infección.

El VDC es eliminado a los 7 días después de la infección y se puede diseminar en casos extremos durante 60 y 90 días, aunque generalmente los periodos de eliminación son menores. La transmisión ocurre directamente por aerosoles o a través de excreciones oculares y nasales, orina y heces. El virus es muy sensible en el medio ambiente y se inactiva rápidamente por lo que la contaminación indirecta es rara. La persistencia del VDC está asociada con la diseminación de virus no-citolíticos. Los genes NP y M contienen los determinantes de la persistencia viral, generalmente asociada con alteraciones en la gemación. El índice de infecciones es más alto que el de la enfermedad, lo que reflejaría un cierto grado de inmunidad natural o resistencia inducida por vacunación.

Patogénesis. Luego de la infección por inhalación, el VDC se multiplica primariamente en los macrófagos alveolares; entre 24 y 48 horas después el virus se multiplica en macrófagos de los ganglios bronquiales y tonsilas. El virus se propaga, como consecuencia de la viremia, a todos los órganos linfoides: bazo, timo, médula ósea y ganglios linfáticos mesentéricos y cervicales. Los morbillivirus y dentro de ellos el VDC inducen rápidamente autofagia lo que produce eficiente difusión del virus célula-célula (Delpeut y col, 2012)lo que explicaría la evolución de la enfermedad.

En esta etapa el virus desarrolla una serie de mecanismos rápidos que permiten neutralizar y evadir la respuesta inmune antiviral innata y adaptativa: (a) utilización de células del sistema inmune como vehículo de transporte a los nódulos linfáticos regionales, (b) replicación deletérea en subpoblaciones de linfocitos entre el primer y tercer día post infección, (c) establecimiento de la viremia primaria asociada a leucocitos, (d) replicación masiva en órganos linfoides con agotamiento selectivo de la subpoblación Th1 y (e) establecimiento del cuadro multisistémico al séptimo día post infección.

Si los anticuerpos neutralizantes se sintetizan rápidamente, alcanzando antes de los 10 días post infección, títulos neutralizantes mayores de 100, los síntomas clínicos son leves y el virus prácticamente no se difunde al resto del organismo. Si la respuesta inmune humoral es débil o tardía, el VDC invade todo el organismo, principalmente los epitelios intestinal, urogenital, respiratorio, y piel, glándulas exocrinas y endocrinas, inclusive el cerebro. La replicación viral produce destrucción celular que clínicamente se traduce en vómitos, diarrea, bronquitis, neumonía, dermatitis y alteraciones en el comportamiento. Las manifestaciones neurológicas son: mioclono, espasmos, paresia, hiperestesia cutánea y convulsiones. El daño cerebral conduce a encefalitis precoz o encefalomielitis progresiva con desmielinización y muerte.

Debido a  la infección de linfocitos y células mononucleares periféricas, el VDC bloquea la síntesis y vías de señalización de interferones y citoquinas, fenómeno que produce agotamiento selectivo de linfocitos CD4⁺  y disminuye la proliferación de linfocitos B y T lo que explica la severa inmunosupresión que caracteriza la infección por el VDC y que conduce a una enfermedad multisistémica asociada a infecciones oportunistas deletéreas. En este punto el virus despliega una serie de mecanismos rápidos que permiten neutralizar y evadir la respuesta inmune antiviral innata y adaptativa mediante: (a) utilización de células del sistema inmune como vehículo de transporte a los nódulos linfáticos regionales, (b) replicación deletérea en subpoblaciones de linfocitos entre el primer y tercer día post infección, (c) establecimiento de la viremia primaria asociada a leucocitos, (d) replicación masiva en órganos linfoides con agotamiento selectivo de la subpoblación Th1 y (e) establecimiento del cuadro multisistémico al séptimo día post infección (von Messling y col, 2004).

Las principales manifestaciones incluyen signos respiratorios y gastrointestinales, inmunosupresión y leucoencefalomielitis  demielinizante (DL).  La función inmune alterada asociada con deplesión de órganos linfoides, consiste de una pérdida de linfocitos asociada a viremia, especialmente LT CD4+, debido a apoptosis de células linfoides en fases tempranas. Después de la eliminación del virus de la sangre periférica una presentación antigénica disminuida y alterada maduración  de linfocitos causa una inmunosupresión en curso a pesar de repoblación de los órganos linfoides.La fase temprana de DL es una secuela del daño directo  mediado por el virus y la  infiltración de  células T CD8 + citotóxicos asociado con una estimulación de las citoquinas pro-inflamatorias tales como la interleuquina (IL) -6, IL-8, factor de necrosis tumoral (TNF )-alfa e IL-12 y una falta de respuesta de las citocinas inmunomoduladoras como la IL-10 y factor de crecimiento transformante (TGF)-beta. Una hipersensibilidad de tipo retardado mediada por células T CD4+ y LT citotóxicas CD8 + contribuyen a la pérdida de la mielina en la fase crónica. Adicionalmente la estimulación de IL-1 y IFN-gama puede ocurrir en lesiones avanzadas.Por otra parte, un balance alterado entre metaloproteinasas de la matriz y sus inhibidores parece jugar un papel fundamental para la patogénesis de la DL. Resumiendo, DL representa un proceso bifásico de la enfermedad que consiste en un proceso inicial con mediación   directa del virus y la progresión de la placa inmune mediada. La inmunosupresión es debido a la temprana linfocitolisis mediada por virus seguido por mecanismos aún  poco conocidos que afectan a la presentación de antígenos y la maduración de linfocitos (Beineke  y col, 2009).

Las cepas virales que inducen infección aguda fatal afectan principalmente la sustancia gris del SNC y provocan destrucción neuronal e incluye únicamente la corteza cerebral y cerebelar. Las cepas virales que causan una enfermedad más leve afectan la sustancia blanca del SNC y provocan desmielinización del cerebelo, nervio óptico y cuerda espinal, en ese caso la recuperación o la muerte puede demorarse por 2 ó 3 meses. Se ha demostrado que el antígeno del VDC tiene un receptor  en las células epiteliales llamado nectina-4 que  a la vez está involucrado  en su neurvirulencia (Pratakpiriya y col, 2012).

Por otro lado es posible la presencia de signos nerviosos sin otros signos previos de enfermedad generalizada. Después de una aparición retardada de respuesta inmune, el virus puede desaparecer de los tejidos linfáticos y epitelios, pero puede persistir en SNC, ojo y almohadilla plantar.

Sintomatología. El período de incubación es extremadamente variable, entre 9 y 14 días y el de diseminación es entre 60 y 90 días. Los síntomas clínicos generalmente aparecen a las dos semanas de la infección, dependiendo fundamentalmente de la relación virus- hospedero. Se pueden observar desde formas inaparentes hasta sobreagudas.La mayoría de las infecciones por el VDC son subclínicas o agudos leves.

Esta es una enfermedad multiepitelial.  Los primeros signos en aparecer son: conjuntivitis, rinitis serosa y luego mucopurulenta, amigdalitis, traqueítis, tos y bronconeumonia. La sintomatología digestiva inicial es diarrea y vómitos, con dolor hepático y renal. El animal camina encorvado y se observa caída del tren posterior, además se aprecian pústulas en la piel del abdomen, hiperqueratosis de los cojinetes plantares (Hardpad) y del morro. En la forma aguda de la enfermedad se describe una curva térmica difásica que alcanza su primer máximo entre los 3 y 6 días post infección: el segundo se presenta entre 7 y 10 días después. Leucopenia (linfopenia) acompaña a los primeros síntomas: conjuntivitis, rinitis y anorexia. Los signos gastrointestinales y respiratorios como tos, diarrea, vómitos, anorexia, deshidratación y pérdida de peso pueden seguir a continuación. Las infecciones bacterianas secundarias a menudo complican este cuadro. En las formas subagudas los síntomas respiratorios y digestivos son discretos, observándose entre 14 y 21 días después síntomas nerviosos característicos tales como incoordinación, convulsiones, alteración del carácter, mioclonías, tortícolis, paresia del tren posterior y problemas visuales. La presentación neurológica incluye: contracciones bruscas involuntarias localizadas de un músculo o grupo de músculos (Mioclonias o corea del moquillo), paresia o parálisis que comienzan a menudo en miembros posteriores (ataxia), convulsiones, sialorrea, movimientos masticatorios, pedaleo de los miembros, micción involuntaria y/o defecación. Hiperestesia, vocalización, reacciones de miedo. Ceguera.Pocos animales escapan a la muerte. Muchos sobrevivientes a esta fase son sacrificados debido a las secuelas que la infección produce.

La forma crónica se presenta en dos formas en perros adultos. Una  se presenta a consecuencia de un proceso inmunomediado que produce una encefalitis multifocal que progresa lentamente. Esta forma normalmente ocurreen los perros de 4 a 8 años. Se presenta con debilidad en miembros posteriores, falta derespuesta a la amenaza, parálisis y temblores de la cabeza. La recuperación de este tipo infección por el VDC puede ser posible.Y la encefalitis crónica del perro viejo que es un desorden progresivo que afecta usualmente a perros mayores de 6 años. Se presenta con ataxia, movimientos encírculo, presión de la cabeza contra objetos y cambios en la personalidad (no hay respuesta a estímulos externos o no reconoce a los dueños). La persistencia del virus en el SNC produce una reacción inflamatoria, instalándose una encefalitis crónica. Estos animales no son infecciosos, pero su recuperación es muy difícil.

Diagnóstico. Los tres elementos para su diagnóstico son: la reseña y anamnesis,  el examen físico y los estudios de laboratorio. A nivel de laboratorio se utiliza como muestra de elección el raspado conjuntival, costra flogística, aspirados de médula ósea y sangre para detectar cuerpos de inclusión eosinofilicos  intranucleares e intracitoplasmáticos. En animal muerto se utiliza la prueba de inmunofluorescencia directa en cortes de ganglios linfáticos aumentados de volumen, bazo, amígdalas, estómago, duodeno, vejiga o cerebro, con el fin de detectar antígenos específicos del VDC. También se utilizan pruebas de inmunohistoquímica. Los hurones son muy susceptibles al VDC.  El uso de cultivos celulares para el aislamiento del VDC tiene la limitante del tiempo que demora esta técnica que puede ser de unas 3 semanas. Sin embargo, nuevas líneas celulares  que expresan el  receptor canino SLAM como las células  VerodogsSLAMtag o Vero-DST permiten obtener resultados en algunos días (Kapil et al, 2011).

Las pruebas inmunológicas incluyen pruebas de inmunofluorescencia y ELISA;  la prueba de la reacción en cadena polimerasa (PCR) y el aislamiento viral son otras técnicas utilizadas en el diagnóstico de esta enfermedad. Inmunofluorescencia se puede realizar en muestras de conjuntiva, tonsilas, epitelio respiratorio, sedimento urinario o LCR para detectar el VDC  de 5 -21 días pos infección. En animales con signos neurológicos, la partícula viral puede ser encontrada en las células del LCR, en el 80% de los casos. Raramente puede encontrarse  falsos positivos en  vacunación reciente, por lo que puede ser necesario  más de una muestra para encontrar e identificar el virus, en otros  casos subagudos o crónicos estas pruebas pueden resultar negativas, sin embargo  no se puede descartar la presencia del virus.

Las cepas vacunales no se detectan por inmunofluorescencia ya que no se diseminan desde el tejido linfoide hasta las células epiteliales. Serología, la medición de anticuerpos séricos IgM (contra las proteínas del núcleo viral NP y P) y las IgG (contra los antígenos de la cápsula H y F), pueden ayudar enel diagnóstico, sin embargo,  la prueba no diferencia anticuerpos maternos, vacunales o por infección. La detección de anticuerpos neutralizantes o   precipitantes no es suficiente para el diagnóstico, debido a que  perros no vacunados e infectados con presentación aguda pueden morir sin aparición de anticuerpos neutralizantes mientras que los infectados en forma subagudo a crónica, pueden tener niveles de anticuerpos comparables con los perros vacunados. ELISA, una prueba de ELISA  detecta anticuerpos IgG o IgM para el VDC.Títulos de IgM altos son específicos para diagnosticar infecciones recientesdel VMC, sin embargo, la vacunación reciente con VVM puede dar resultados falsos positivos. El método molecular PCR permite detectar el ARN viral y puede resultar positiva aun cuando las pruebas de aislamiento viral y la inmunofluorescencia no logren detectar al virus. También se puede realizar análisis serológico del líquido cefalorraquídeo. Los signos neurológicos suelen aparecer entre 1 y 3 semanas, luego que el perro se ha recuperado de los signos gastrointestinales y/o respiratorios. La determinación de anticuerpos específicos contra el virus en LCR es diagnóstico de encefalitis por distemper (Wheeler, 2007).

Un "test" de diagnóstico rápido para el virus distemper que se ofrece en el comercio es: Prueba Rápida para el Antígeno del Virus de Distemper Canino: La prueba rápida del antígeno del virus de distemper canino,Quicking, es un ensayo inmunocromatográfico tipo sándwich de flujo lateral para la detección cualitativa del antígeno del virus de distemper canino (CDV Ag) en las secreciones o suero de perros. Tiempo de Ensayo: 5 a 10 min. Muestra: Secreciones o suero.

El virus del Distemper canino puede ser encontrado en biopsias superficiales de 1 cm de piel normal del cuello dorsal, es una prueba ante-mortem fiable en cuanto a  sensibilidad y especificidad. La muestra para biopsia puede  conservarse en formol al 10% o congelarse, según la técnica a usar, sea inmunohistoquímica, inmunofluorescencia o PCR. Esta prueba puede demorar 2-7 días para tener el diagnóstico.

Vacunas. La mayoría de las vacunas contra el DC utilizadas en USA, Canadá y Europa  corresponden al genotipo  American-1 (Onderstepoort), con la excepción de la vacuna Vanguard  que corresponde al genotipo  America-2.

Una vacuna ideal  contra el distemper  canino debe ser capaz de estimular una respuesta inmune de distribución sérica y de mucosas,  previniendo la enfermedad desde la exposición al virus, e impidiendo el desarrollo de inmunosupresión y de cuadros patológicos de alta letalidad.

Se ha descrito que los virus atenuados utilizados actualmente en vacunas polivalentes poseen un cierto linfotropismo y capacidad de inducir inmunosupresión residual, comprometiendo la respuesta inmune.Cualquier vacuna preparada con VVM puede ser fatal para especies exóticas por lo que deben utilizarse vacunas preparadas con virus inactivado.

La estabilidad de las vacunas liofilizadas contra el distemper es de 16 meses mantenidas entre 0 y 4º C; 7 semanas a 20º C y 7 días con luz solar y a 47º C. La vacuna reconstituida dura 1 hora en refrigeración.

Los esquemas de vacunación que se aplican son diferentes según sea el riesgo imperante en la ciudad o zona amagada. Considerando que los cachorros no son inmunocompetentes antes de los 2 meses de vida y que los anticuerpos maternos (94% en calostro) duran en el recién nacido aproximadamente entre 8 y 10 semanas, y que entre las 12 y 14 semanas disminuyen a un valor 0, se aconseja el siguiente esquema con vacuna monovalente: 1ª dosis a los 2 ½ -3 meses; 2ª dosis a los 3 ½ -4 meses; 3ª dosis a los 6 meses, si hay un notorio aumento de los casos clínicos. Con vacuna triple (virus distemper, leptospira, y virus hepatitis) o séxtuple (virus distemper, leptospira, virus hepatitis 1 y 2, parvovirus canino tipo 2 y parainfluenza tipo 2) se aconseja aplicar la primera dosis de vacuna parvovirus a los 2 meses; luego a los 2 ½ meses la vacuna séxtuple y a los 4 meses la vacuna séxtuple o la vacuna triple. La vacuna recombinante óctuple se aplica desde las 6 semanas de edad y cada 21 días hasta las 12 semanas (3 dosis) (Mendoza y col, 2005).

Sin embargo en los últimos años la incidencia del moquillo en caninos parecehaber aumentado, debido a fallas en la vacunación, inmunización insuficiente ya la posible emergencia de cepas genéticamente distintas.

Considerando que el virus DC afecta aun amplio rango de carnívoros causando brotes de la enfermedad en una amplia variedad de poblaciones de carnívoros y a que las vacunas preparadas con virus vivo atenuado no son seguras en estas especies, se ha producido un virus quimérico combinando la vacuna Moraten del sarampión con la envoltura de aislados recientes del virus DC. El virus resultante no causa la enfermedad ni inmunosupresión en hurones, confiriendo protección frente al desafío con una cepa letal.

Aplicación de interferón. El rFeIFN contenido en Virbagen Omega es producido por gusanos de seda infectados por un baculovirus recombinante. El Virbagen Omega es un producto que cuenta con propiedades antivirales, inmunomoduladoras y antitumorales.Tanto en perros como en gatos ha demostrado tener una excelente tolerancia, situación que contrasta con lo sucedido en medicina humana donde el usode interferón está asociado a efectos secundarios con grados variables de severidad.El empleo del Interferón Omega Recombinante de origen Felino dentro de la terapéutica del moquillo canino se desarrolló en Japón hacia finales de los años noventa. Virbagen Omega 2MU/animal. El tratamiento con Virbagen Omega permite: Disminuir la mortalidad y severidad de los signos clínicos y disminuir el riesgo de presentación de signos nerviosos en animales que se infecten de moquillo canino.

Con el fin de minimizar el daño inicial sobre la mielina (causado principalmente por radicales libres secretados por la microglia), se recomienda el uso de antioxidantes, vitamina E, vitaminas del complejo B y altas dosis de vitamina A.

Dos drogas con efecto antiviral promisorio sobre  el VDC son azatioprina y ribavirina. La primera ha sido utilizada experimentalmente desde el año 2006 en el tratamiento de esta virosis, que además  de controlar la naturaleza inmunomediada del cuadro neurológico, ha mostrado ser una muy buena alternativa terapéutica, logrando limitar el progreso del cuadro multisistémico, aumentar la sobrevida y disminuir la presentación del cuadro neurológico.  La ribavirina se caracteriza por inhibir la replicación viral a muy bajas concentraciones.

Distemper canino en animales silvestres

Distemper canino en focas. En 1997, más de 11.000 focas del Caspio fueron encontradas muertas a lo largo de la costa de Kazakhstan, atribuyéndose esta mortandad principalmente al VDC y a altos niveles del insecticida DDT. Según Kuiken et al. (2006), más de 10.000 focas (Phocacaspica) fueron reportadas muertas en  el Mar Caspio, durante la primavera-verano del año 2000. La infección por virus distemper canino fue confirmada por análisis filogenético de RT-PCR. Por su parte Harkonen et al.(2006), señalan que epidemias de distemper focino (PDV) resultaron en muerte de más de 23.000 focas (Phocavitulina) en 1988 y 30.000 en 2002. En ambas ocasiones las epidemias se iniciaron en la isla danesa de Anholt.

En 1999 hubo un brote de DC en la Isla Santa Catalina, California USA,  que afectó a los zorros nativos que disminuyeron desde 1.330 individuos a menos de 100.

Distemper canino en las Islas Galápagos. Entre febrero y junio de 2001 se presentaron 596 casos de DC, de los cuales 275 murieron por causa de la enfermedad y 294 fueron eutanasiados. Los perros enfermos presentaban enflaquecimiento progresivo, secreciones oculares, salivación profusa, estornudos con secreciones nasales, respiración agitada y con dificultad, temblores musculares en cualquier parte del cuerpo, incoordinación de movimientos, entre otros. Las principales medidas tomadas para evitar que la epidemia se extendiera a mamíferos marinos fueron: prohibición de perros en las calles y cerca de los muelles y playas, aplicación de eutanasia a animales enfermos previa solicitud de sus dueños e incineración de cadáveres. Además se realizó un estudio serológico en lobos marinos de diferentes colonias e islas, sin encontrarse seropositivos contra el VDC. Se concluyó que la mejor solución era realizar una campaña masiva de vacunación para disminuir el riesgo de contagio a lobos marinos.

Distemper canino en leones y tigres. El primer caso de distemper en tigres ocurrió en California 1980. En 2003 se describe el distemper canino en un tigre (Panthera tigres) de circo que presentaba una sintomatología de encefalitis (incoordinación y ataxia), opacidad corneal inicial y panoftalmitis severa. El diagnóstico se basó en inmunofluoresencia positiva en muestras de orina y conjuntiva. En leones (Panthera leo) del ecosistema Serengeti-Mara de África del Este se han descrito epidemias de una enfermedad semejante al distemper canino y asociada con el VDC. Entre 2003 y 2004 murieron 1000 leones de un total de 3000 de un parque en Serengeti, Tanzania; en un león enfermo que sufría de ataques epileptiformes se observó salivación excesiva, mandíbulas contraídas, expresión facial alterada con pupilas contraídas y luego dilatadas; los leones enfermos no podían comer ni cazar por lo que eran víctimas de depredadores. Estudios realizados con PCR demostraron que el virus aislado tenía una estrecha relación filogenética con el VDC. Otros animales afectados fueron chitas (Acinonyxjubatus) y perros salvajes africanos (Lycaonpictus). Anteriormente, entre 1991 y 1992, en un parque de vida silvestre de san Fernando, California USA, se enfermaron de distemper, además de leones y tigres, leopardos (Pantherapardus) y jaguares (Pantheraonca), animales que presentaban anorexia, enfermedad gastrointestinal o respiratoria y convulsiones, muriendo 17 de ellos. La tipificación del virus aislado se realizó mediante anticuerpos monoclonales contra el VDC; el diagnóstico se corroboró mediante la detección de anticuerpos seroneutralizantes específicos. En 2013 se describe que un 15% de tigres siberianos se infectaron con el virus del distemper en el Este de Rusia; anteriormente en Pokrosvka, Rusia, 2003, se había muerto una tigresa diagnosticada con distemper.

Distemper en mapaches en Medford y Ashland, Oregon, USA, 2005. Se describen casos de distemper canino en mapaches que presentan exudado nasal u ocular, andan desorientados y desinteresados en tomar agua y alimentos. El distemper sería cíclico y ocurriría cuando las poblaciones de mapaches invaden las ciudades. En 1992 también se presentó la enfermedad matando a un cierto número de mapaches. En estas circunstancias los zorrillos o mofetas fueron reubicados con el fin de no sacrificarlos.

Distemper en monos. Un brote de DC ocurrió en monos (Macaca fuscate)  de Japón en 1989. Desde 2006 se han descrito brotes de DC en monos Rhesus (Macaca culatta) criados en grandes establecimientos de crianza de China. Alrededor de 10.000 monos contrajeron la enfermedad muriendo un poco más de 4.250. El genotipo del VDC correspondía al genotipo Asia.  En Brasil se describe el DC en lessergrison (Galictis cuja) (Mejid y col., 2013).

Considerando el aumento de casos diagnosticados en especies silvestres es necesario aumentar la vigilancia del VDC en perros y poblaciones silvestres con el fin de identificar nuevos genotipos y seguir la diseminación de las cepas  dentro y entre las distintas especies.

Situación del distemper canino en Chile

El DC es una enfermedad infecciosa de alta prevalencia en este país.
Se ha detectado el DC desde hace muchos años, principalmente a través de diagnóstico clínico y anatomopatológico, y ocasionalmente por inmunofluorescencia.  Históricamente en 1935, se detectó la muerte del 30% de la población canina en el canódromo de Santiago afectada por el distemper.

En un estudio sobre epilepsia epizoótica canina en que se analizaron 50 casos atendidos en el policlínico de animales menores de la Escuela de Medicina Veterinaria de la Universidad de Chile, entre julio de 1966 y agosto de 1968, los animales presentaban crisis episódicas de tipo epiléptico caracterizadas por crisis de huida, furor o espanto, con pérdida de conciencia, sin manifestaciones convulsivas de pequeño o gran mal, y con o sin relajación de esfínteres. De acuerdo al análisis de los resultados se plantean tres hipótesis sobre su etiología: a) Una nueva forma clínica de las entidades del complejo distemper, b) Una mutante del virus distemper sin inmunidad cruzada, y c) Una nueva enfermedad, de naturaleza contagiosa, de carácter encefalótropo, posiblemente de origen viral (Román y col., 1968).

En 1994 se informó del aislamiento del virus en cultivos celulares de riñón de perro (MDCK) inoculados con secreción nasal, ocular y traqueal provenientes de un cachorro con signos respiratorios, disnea respiratoria y estertores bronquiales. El animal enfermo presentaba además signos nerviosos con mioclonía unilateral, movimientos masticatorios involuntarios y paresia ascendente del tren posterior. El diagnóstico se corroboró por microscopía electrónica y estudios histopatológicos que demostraron la presencia de cuerpos de inclusión intracitoplasmáticos acidófilos (Cerda y col., 1994).

En perros provenientes de la Región Metropolitana se detectó la presencia de Mycoplasmasp en procesos bronco pulmonares recidivantes en animales afectados de distemper canino (Abalos y Berríos, 1980).

Ernst, Metayer y Huber (1987) plantean que variables climáticas explican el 12,11% de la variabilidad de la prevalencia de distemper, especialmente influido por los parámetros climatológicos de temperatura y humedad.

Al analizar los registros clínicos, entre 1975 y 1984, de la Clínica de Pequeños Animales del Hospital Veterinario de la Universidad Austral de Chile en Valdivia, se identificaron caninos con diagnóstico clínico de distemper y hepatitis infecciosa, encontrándose que los perros menores de 1 año tenían un alto riesgo de contraer distemper canino y hepatitis mientras que en razas mixtas (mongrel) el riesgo de contraer distemper era significativamente mayor (Ernst, Metayer y Martin, 1987).

Luego de inocular un aislado nacional semejante al virus distemper canino en hembras de ratones Balb-C de 8 semanas de edad y al 5º día de ser cubiertas, se concluyó que este aislado viral era un buen inmunógeno, comparable con las cepas vacunales y con la ventaja de ser una cepa nativa actuante en el medio nacional. Los autores consideran que el período ideal de vacunación sería a partir de los 3 meses de edad en caninos, encontrándose que el máximo nivel de anticuerpos se obtiene a los 30 días post inoculación. No se presentaron abortos inducidos por el virus en el primer tercio de gestación, ni malformaciones del sistema nervioso central en las crías nacidas en este período (Cerda y Quinteros, 1995).

En un estudio pionero utilizando el aislado nacional semejante al virus distemper canino se determinó en forma comparativa la capacidad inmunogénica de vacunas comerciales contra el distemper canino, para ello se trabajó con un universo de 40 caninos de 45 días a 10 años de edad, los que se sometieron a tres programas de inmunización: Primer programa, vacunaciones a los 45, 55, 65 y 75 días con revacunación al año de edad; segundo programa, vacunaciones a los 30, 90 y 100 días con revacunaciones al año de edad; tercer programa, vacunaciones a los 45 y 150 días con revacunaciones hasta los 6 meses de edad. Los resultados obtenidos indican que la respuesta inmune es variable dependiendo de las condiciones de estrés y edad de vacunación, encontrándose que frente a situaciones de confinamiento los mayores títulos de anticuerpos se obtuvieron con el primer programa. En mascotas no confinadas se encontró una mayor seroconversión al aplicar el tercer programa. Se señala que los animales bajo la administración de corticosteroides por períodos prolongados presentan una ausencia total de títulos séricos protectivos. En aquellos animales provenientes de madres con altos títulos de anticuerpos y que son vacunados tempranamente se detectó una notoria neutralización de los anticuerpos maternos. En este trabajo se concluyó que para lograr un mayor nivel inmunitario pasivo en los cachorros, es necesario vacunar a las hembras al inicio del celo. Además se establece que se alcanzan niveles protectivos a partir del primer año de edad, los que permanecen estables en el tiempo sometiendo a los perros a revacunaciones bianuales. Los animales mayores de 10 años mostraron un descenso en el nivel de anticuerpos específicos (Cerda y Quinteros, 1996).

En 2002, Navarro et al, informan del aislamiento de una cepa viral diagnosticada como virus distemper canino por inmunofluorescencia. La muestra había sido obtenida desde tejido nervioso de un perro adulto con sintomatología nerviosa.

En el estudio realizado en un total de 535 fichas con diagnóstico de distemper en base a la presencia de signologíamultisistémica como alteraciones neurológicas, fiebre, signos respiratorios, signos gastroentéricos, hiperqueratosis y otros, en animales atendidos en el servicio de clínica menor de la Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias, Universidad de Chile, entre mayo de 1975 y septiembre de 1991, se encontró un mayor porcentaje de machos (72,15%) que de hembras (27,85%) y un mayor porcentaje de animales mestizos (84,67%) en relación a caninos finos (15,33%), y una altísima proporción de consultas en animales menores de 1 año (83,55%). La sobrevida por distemper canino en el conjunto total de animales mostró una fuerte pérdida entre el día 1 y día 50. Sin embargo, la prueba log-rango demostró que no había diferencias significativas entre edades, sexo, razas ni estaciones (Morales y col., 1997).

En 2003 se describe una mortandad de zorros Chillas y Culpeos causada por el virus distemper canino en Coquimbo. Caso índice  en chillas en Puerto Velero, cerca de Tongoy y luego de 5 meses en  culpeos  a 50 km al sur de caso índice.Se sospecha de transmisión del VDC  desde perros en los alrededores del parque.

Un posible caso de distemper canino ocurrió en el Parque Nacional Fray Jorge (Limarí, Ovalle) IV Región, donde se detectaron perros y zorros con síntomas de esta enfermedad. En 2003 en al menos dos ejemplares de zorros gris (Pseudalopexgriseus) se observó sintomatología tipo convulsiones en los días previos a su muerte. Un zorro moribundo estaba deshidratado, desorientado y presentaba salivación y mioclonías generalizadas. Otros ejemplares recolectados moribundos presentaban diversos síntomas como: secreción ocular purulenta, miooclonías, ataxia, emaciación leve y hemorragias leves. La mayoría de los zorros muertos correspondían a la especie culpeo (P. culpeaus). El examen histopatológico reveló neumonitis, depleción linfocitaria en bazo y presencia de cuerpos de inclusión eosinofílicosintracitoplasmáticos en vejiga y pulmón. El examen citológico de frotis conjuntival fue positivo a cuerpos de inclusión de distemper canino. La determinación de anticuerpos (IgG) contra virus distemper canino reveló un título de 640 y 160 en dos muestras de dos zorros analizados. Los exámenes arrojaron serología negativa a leptospira y ehrlichia. El cerebro de un zorro enviado al Instituto de Salud Pública fue negativo en inmunofluorescencia directa En base a estos antecedentes los autores concluyeron que el evento correspondió a un brote de distemper canino, recomendando evitar el contacto de poblaciones de perros domésticos de turistas y del perímetro del Parque con los zorros (Moreira y Stutzin, 2005).

En 2007 se describe un brote de DC en la isla Robinson Crusoe, Archipiélago Juan Fernández, V Región. En 85 perros enfermos, 83 fueron diagnosticados con DC y 2 con gastroenteritis, con una tasa de ataque de 66,9 casos de DC x 100 animales. Se describe   sintomatología clínica compatible con distemper canino:   anorexia, aumento de temperatura corporal, decaimiento, postración, gemidos constantes, posición de xifosis, con evidente paraparesia flácida, deshidratación; secreción mucosa ocular verde-amarillenta, bilateral y secreción nasal mucopurulenta, bilateral; disnea, dolor abdominal a la palpación, dolor paralumbar como respuesta a compresión de zona paravertebral lumbar, aumento de volumen en articulación carpiana, diarrea acuosa de color café- amarillento. En  vejiga se encontraron abundantes  cuerpos de inclusión eosinofílicos intracitoplasmáticos (Jara, Matus y Moreira, 2007).

El DC en el mundo parece haber aumentado en las últimas décadas (Martella, 2008). En Chile como en muchos países del mundo el distemper canino se sigue presentando a pesar de la vacunación.

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